apelin-13促进乳腺癌mcf-7细胞增殖及转移机制研究

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1、学校代码：10200研究生学号：2012102085分类号：Q4密级-无硕士学位论文Apelin-!3保进队腺癌MCF-7细胞增技及转移机制研究TheMechanismofApelin-13PromotingBreastCancerMCF-7CeilsProliferationandInvasion作者：彭雪微指导教师：霍洪亮副教授f科专业：生理学研究方向：分子细胞生理学学位类型：学历硕士东北师范大学学位评定委员会

2、,2015年5月学校代码：10200研究生学号：2012102085分类号：Q4密级：无硕士学位论文Apel

3、in-13促进乳腺癌MCF-7细胞增殖及转移机制研究TheMechanismofApelin-13PromotingBreastCancerMCF-7CellsProliferationandInvasion作者：彭雪微指导教师：霍洪亮副教授学科专业：生理学研究方向：分子细胞生理学学位类型：学历硕士东北师范大学学位评定委员会2015年5月独创性声明木人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下独立进行研究工作所取得的成果。据我所知，除了特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。对木人的研究

4、做出重要贡献的个人和集体，均已在文屮作了叨确的说明。木声明的法律结果由木人承担。学位论文作者签名：atM—日期：yKi.Q(学位论文使用授权书木学位论文作者完全了解东北师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：东北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。木人授权东北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编本学位论文。(保密的学位论文在解密后适用木授权书）学位论文作者签名:mm指导教师签名：卞吸、知曰期：球Lf

5、j�日期：丄:(、,学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话:通讯地址：邮编:摘要Apelin是G蛋白偶联受体APJ的配体，是一种天然内源性活性肽，具有多种亚型。其中apelin-13是主要的亚型，广泛分布在人多种组织器官中，主要有乳腺、肺、心脏、肾等。现已证实，apelin在多种恶性肿瘤组织如肝癌、肺癌、子宫癌、口腔癌等过度表达，能够促进肿瘤细胞的增殖及血管再生，加剧肿瘤恶化。然而，apelin-13对乳腺癌中的影响及其分子机制仍不是十分清楚。因此，本文通过一系列实验探究了apelin-13对乳腺癌MCF-7细胞的影响。通

6、过MTT法和Brdu标记的流式细胞术证明了apelin-13能够促进MCF-7细胞增殖，并且具有浓度依赖性。细胞在增殖过程中，激活G1期是关键过程。细胞周期蛋白cyclinD1是促进细胞周期G0/G1向S期转化的关键分子。有研究发现乳腺癌组织中有大量cyclinD1表达。因此，我们采用ELISA和RT-PCR法检测了cyclinD1在蛋白水平和转录水平的表达。结果表明apelin-13能够上调cyclinD1的表达，且具有浓度依赖性。正常细胞发生癌变时细胞形态会随之改变，易穿过周围致密的结缔组织而侵袭转移到其他组织或器官中

7、。可见，癌细胞的侵袭转移是肿瘤恶化的重要环节。基质金属蛋白酶MMP-1是降解胞外基质的主要胶原酶，其过表达与肿瘤的治疗及预后密切相关。因此，我们通过Transwell细胞侵袭实验、ELISA和RT-PCR检测了apelin-13对MCF-7细胞侵袭和MMP-1表达的影响。Transwell结果显示随着apelin-13浓度的升高，侵袭到下室的细胞数量增多。ELISA和RT-PCR实验结果显示apelin-13分别在蛋白水平和转录水平上调MMP-1的表达。这些结果说明apelin-13对MCF-7细胞的侵袭具有促进作用。Ap

8、elin-13是否通过ERK1/2信号通路促进乳腺癌MCF-7细胞增殖及侵袭，我们采用Westernblot法检测了ERK1/2的磷酸化水平。结果表明，apelin-13上调ERK1/2的磷酸化，且具有浓度依赖性。阻断ERK1/2信号通路后，能够明显抑制apelin-13对ERK1/2的活化作用。为了进一步研究apelin-13对MCF-7细胞的促增殖及侵袭作用是否与apelin-13激活ERK1/2信号传导通路相关联，实验开始先加PD98059预刺激细胞1h，然后10μMapelin-13刺激细胞检测细胞的增殖及侵袭情况

9、。结果发现PD98059和apelin-13共孵育组与apelin-13单独处理组相比，MCF-7细胞的增殖及侵袭均受到了显著抑制。说明apelin-13是通过ERK1/2信号通路介导的。近年的研究发现乳腺癌扩增性抗原AIB1是一种潜在的致癌因子。AIB1基因在多种肿瘤，尤其在乳腺癌组织中异常表达。因此