alpha2a肾上腺素受体-cx43信号通路诱导镜像痛敏的作用与机制

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1、延安大学学位论文Alpha2A肾上腺素受体-Cx43信号通路诱导镜像痛敏的作用与机制专业名称：生物化学与分子生物学作者姓名：侯仁浩指导教师：白占涛分类号：Q735单位代码：10719学号：12114003密级：论文题目：Alpha2A肾上腺素受体-Cx43信号通路诱导镜像痛敏的作用与机制论文作者：侯仁浩指导教师、职称：白占涛教授学科、专业名称：生物化学与分子生物学提交论文日期：二〇一五年六月创新性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢中所罗列的内容以外，论文中不包含其他

2、人已经发表或撰写过的研究成果；也不包含为获得延安大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。本人签名：日期：关于论文使用授权的说明本人完全了解延安大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属延安大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位仍然为延安大学。学校有权保留送交论文的复印件，允许查阅和借阅论文；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。

3、（保密的论文在解密后遵守此规定）本学位论文属于保密在年解密后适用本授权书。本人签名：日期：导师签名：日期：IAlpha2A肾上腺素受体-Cx43信号通路介导镜像痛敏的作用与机制生物化学与分子生物学侯仁浩指导老师：白占涛教授摘要：疼痛给人类健康带来严重威胁，而且疼痛发生后损伤部位同体节的对侧对称部位往往会出现镜像痛敏，因其表现持续时间长且类型多样，从多方面限制了疼痛的治疗。近年来，尽管相关疼痛调控机制研究和医学转化发展迅猛，但仍缺乏对诸如镜像痛敏等复杂表症发生、发展和维持机制的系统理解。多方证据表明，alpha2A肾上腺素受体（alpha2A-AR）、缝隙连接胞间通讯、神

4、经胶质细胞均可通过不同途径参与疼痛调控，但其互作机制尚待阐明。本文实验性镜像痛敏动物模型，经大鼠足底皮下注射东亚钳蝎蝎毒主要成分—蝎毒素多肽类特异性钠通道调制剂BmKI，采用行为学、实时定量PCR、免疫印迹和免疫荧光、活细胞成像等实验技术，探索外周和中枢alpha2A-AR、连接蛋白Connexin43（Cx43）、神经胶质细胞与镜像痛敏发生、发展和维持的相关性，构建alpha2A-AR-Cx43信号通路调控镜像痛敏分子与细胞机制的创新知识体系。主要结果如下：(1)Alpha2A-AR激动剂与缝隙连接解阻断剂对BmKI诱发疼痛行为的协同抑制：经大鼠单侧足底皮下注射BmK

5、I，可诱发持续的自发痛、注射同侧的热痛敏和机械痛敏和对侧镜像机械痛敏。单独预先鞘内注射alpha2A-AR激动剂可乐定或缝隙连接阻断剂Carbenoxolone(CBX)均可显著抑制BmKI诱致的自发痛和镜像机械痛敏，同时注射可乐定与CBX呈现显著的协同抑制作用增强。这些结果表明，脊髓和背根神经节alpha2A-AR与Cx43均参与了BmKI诱致疼痛发生、发展和维持的调控，二者可能存在表达分布和细胞信号通路的功能联系。（2）背根神经节alpha2A-AR-Cx43差异表达与镜像痛敏的相关性：qRT-PCR和免疫印迹定量结果显示，BmKI诱致双侧背根神经节alpha2A-

6、ARmRNA，卫星胶质细胞标记物GFAP蛋白水平上调而对侧下调，双侧背根神经节小胶质细胞标记物Iba1蛋白上调，双侧背根神经节Cx43mRNA下调。免疫荧光双标结果验明，背根神经节alpha2A肾上腺素受体与Cx43有共标。该受体在GFAP，IBA1阳性卫星胶质细胞上均大量表达，在大直径神经元、非肽能神经元表达上亦有表达。BmKI注射II后，alpha2A肾上腺素受体与这些标记蛋白的共标量显著升高。预先鞘内注射alpha2A肾上腺素受体激动剂可乐定给药组则逆转上述变化。这些结果表明，背根神经节alpha2A-AR表达分布具有细胞多样性。疼痛刺激条件下，alpha2A-A

7、R-Cx43信号通路在持续外周神经传入的传递整合中具有重要调控作用。（3）脊髓alpha2A-AR与Cx43差异表达与镜像痛敏的相关性：与背根神经节比较，脊髓alpha2A-AR与Cx43表达呈现较大差异。免疫荧光检测验明，alpha2A-AR与星形胶质细胞标记物GFAP、Cx43均有共标于脊髓深层，而与小胶质细胞标记物OX42则共标较少，共标随自发痛和痛敏行为发生、发展、维持、恢复过程而呈现先增加后减少的趋势，并逐渐由内侧向外侧迁变。定量结果显示，BmKI注射后脊髓双侧alpha2A-AR蛋白与mRNA呈降低趋势（与背根神经节增高的结果