鸡h9n2亚型流感病毒遗传变异研究

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1、鸡H9N2亚型流感病毒遗传变异研究StudyontheGeneticVariationofChickenH9N2InfluenzaViruses国家自然科学青年基金项目（31101825）H3与H9亚型流感病毒跨越种间屏障传播的分子机制研究作者姓名：冉伟专业名称：预防兽医学指导教师：丛彦龙副教授学位类别：农学硕士论文答辩日期：2015年6月3日内容提要本研究对出现流感症状、H9N2疫苗免疫鸡群进行了H9N2病毒分离，并开展了4株代表株的遗传变异和生物学特性分析。遗传分析显示，Y280-like亚系出现了一个新的流行分支—JL12-like，该

2、分支是2013年H7N9和H10N8内部基因的最主要“母源”病毒。JL12-like病毒与我国目前使用的商用疫苗株（A/Chicken/Shandong/6/1996，SD96）遗传距离较远，与Y280-like亚系内其它分支病毒的抗原相似性也较低（R≤35.4），说明JL12-like病毒正在发生或已经发生了抗原性改变。受体结合鉴定结果表明，4株病毒偏嗜结合人型SAα2,6受体，暗示它们具有感染人的潜能。但不同于先前的认识，HA226位氨基酸对H9N2病毒的受体偏嗜性并没有严格限制，然而226位L/Q的替换可轻微改变其空间构象。耐药性分析显

3、示，NA264位额外糖链的出现，会使病毒对扎那米韦产生耐药性。上述结果表明，我国鸡群中普遍存在的H9N2病毒在持续地演化，现有疫苗免疫已经不能完全保护鸡群免于新流行毒株的侵袭，相反，免疫后可能加速病毒的遗传变异，因此有必要补充或更换疫苗毒株。频繁的基因重排、感染人案例的增多、相关从业人员较高的抗体阳性率以及大多数H9N2病毒具有偏嗜人型SAα2,6受体的事实，说明我们正在受到来自H9N2病毒的巨大威胁，应该审视H9N2病毒在流感流行与进化中的重要地位，密切监测H9N2病毒的流行动态与遗传变异规律，适时更新疫苗，相关从业人员应该重视生物安全防控

4、措施。I中文摘要鸡H9N2亚型流感病毒遗传变异研究疫苗接种是防控禽流感发生与传播的有效手段，对提升我国的禽病防制水平、保障养禽业的健康发展具有十分重要的意义。但是，疫苗的频繁使用、广泛使用甚至滥用也促使流感病毒在免疫压力的驱动下不断变异。H9N2作为家禽中流行最广泛的流感病毒亚型，不仅具有感染人的潜能，而且可以作为“母源”病毒为其他亚型病毒提供内部基因，继而可能产生引发人流感流行的毒株。鉴于H9N2病毒的流行能力与潜在公共威胁，深入开展H9N2病毒遗传变异和生物学特性的研究工作，不仅对防制动物及人间流感的流行具有重要意义，而且为及时研制疫苗和

5、新型抗病毒药物提供理论依据。本研究以2012年3-12月自吉林地区免疫鸡群中分离到的4株H9N2病毒为研究对象，对其遗传变异规律和生物学特性进行了系统分析。在系统发育进化树上，可以将H9N2病毒分为北美谱系和欧亚谱系，其中欧亚谱系包括Y439-like、KR323-like、G1-like和Y280-like4个亚系。遗传进化分析结果表明，流行于我国的Y280-like亚系病毒除了已经发现的G9-like、BJ94-like、SD98-like、Y280-like和SH98-like5个分支，又出现了一个新的分支—JL12-like。而且，该

6、分支病毒是为2013年H7N9病毒提供内部基因的最主要“母源”病毒。JL12-like分支病毒与我国现有疫苗株在遗传距离上相距较远，暗示疫苗株与JL12-like病毒之间存在抗原差异。抗原位点分析显示，与H9N2商用疫苗株A/Chicken/Shandong/6/1996（SD96）相比，JL12-like分支病毒有3-4个抗原位点发生改变。交叉血凝抑制实验结果表明，JL12-like分支与所属亚系内的其它5个分支的抗原性不同。JL12-like分支与Y280-like分支抗原差异较小（R≥35.4），而与G9-like、BJ94-like、

7、SD98-like和SH98-like分支抗原差异较大（（R≤25.0）），说明该分支病毒正在发生或已经发生了抗原性改变，提示现有疫苗有待更新。受体结合性鉴定结果表明，4株H9N2病毒与SAα2,3和SAα2,6两类受体均能结合，但偏嗜结合SAα2,6（p<0.05），说明它们在保留了禽流感病毒的受体结合特性之外，II又获得人流感病毒的受体结合特性，由此具备了感染人的潜能。分子模拟显示，4株病毒的HA与两类受体结合能量值均为负值，即HA与两类受体能够有效结合。但HA与人型受体结合能量的负值的绝对值更大，即二者结合的空间构象更为稳定，这与受体结

8、合性鉴定结果一致。分子模拟与分子叠合结果显示，HA226氨基酸可以不直接与受体结合，暗示226位单一氨基酸突变并不足以改变病毒受体结合嗜性，但HAQ/L的转变可以改