高血氨诱导肝细胞损伤及其代谢组学的研究

《高血氨诱导肝细胞损伤及其代谢组学的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码10459学号或申请号201111440152密级公开博士学位论文高血氨诱导肝细胞损伤及其代谢组学的研究作者姓名：王琼叶导师姓名：阚全程教授学科门类：医学专业名称：内科学培养院系：第一临床学院完成时间：2015年3月AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorAStudyonHyperammonemia-inducedHepatocyteInjuryandItsMetabonomicsByQiongyeWangSupervisor:Pr

2、of.QuanchengKanMedicine,InternalMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。；学位论文作者：日期：年y月71日学位论文使用授权声明本人在导

3、师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。7学位论文作者：日期：年r月曰摘要高血氨诱导肝细胞损伤及其代谢组学的研究研究生王琼叶导师阚全

4、程郑州大学第一附属医院消化内科郑州450052摘要肝衰竭是常见的危重症，死亡率高达70~80%。肝衰竭的发病机制尚不清楚，其治疗仍是世界性难题。在肝衰竭中，存在大量肝细胞坏死，肝功能受损，肝细胞再生和分化障碍，是导致患者死亡的重要原因之一。残存的肝细胞无法满足机体的需要，导致肝细胞的转化和代谢功能紊乱，引发如血氨、乳酸、间接胆红素等代谢产物蓄积。目前“二次损伤”学说是肝衰竭发生发展的重要机制之一，肝衰竭最常见的代谢紊乱---高血氨，其神经毒性已经被众多学者研究，但是它是否会造成肝脏的二次损伤未见相关报道。我们以高血氨为研究肝

5、衰竭的切入点，前期首次建立高血氨攻击大鼠模型，证实高血氨可以诱导大鼠肝脏的“二次损伤”，但是尚未在细胞水平研究高血氨对人肝细胞的损伤作用及其机制。肝脏是人体非常重要的代谢器官，当肝脏出现病理改变，必然伴随与之相关代谢网络的变化。因此研究高血氨对肝细胞损伤机制，不能仅着眼于肝细胞本身的损伤，还需要用整体性思维即系统生物学来研究。高血氨诱导肝损伤的代谢组学研究在国际上鲜有报道。于是研究高血氨诱导肝细胞损伤及其代谢组学，为揭示高血氨在肝衰竭中的分子生物学机制提供理论基础，并为肝衰竭的预防和治疗提供新的干预策略和作用靶点。方法1氨对

6、肝细胞特异性损伤作用首先构建高血氨细胞模型，采用CCK-8法和流式细胞仪检测氨对不同细胞I摘要系增殖和凋亡的影响，探讨氨对肝脏细胞的损伤和凋亡作用是否具有特异性。采用Real-timePCR和WesternBloting检测氨转运相关蛋白:RhC型糖蛋白（Rhfamily,Cglycoprotein，RHCG）和水通道蛋白8（aquaporin-8，AQP8）的表达，探讨其特异性机制。采用电子显微镜和活体细胞线粒体膜通道孔（MitochondrialPermeabilityTransitionPore，mPTP）荧光检测，观

7、察细胞线粒体形态并检测线粒体膜通透性，以探讨其可能的损伤机制。2氨对肝细胞代谢谱的影响建立以气相色谱-质谱联用（gaschromatography-massspectrometry，GC-MS）技术为基础的高血氨细胞模型代谢组学方法，了解高血氨对肝细胞代谢谱的影响，结合多元数据分析和比对数据库等方法，筛选并鉴定出差异代谢产物，找出差异代谢通路。根据GC-MS结果提供的相关线索，结合Real-timePCR、WesternBloting等技术对差异代谢通路进行验证和深入研究。结果1氨对肝细胞具有特异性损伤作用1.1氨对肝细胞增

8、殖和形态的影响以及建模浓度的选择随着氨浓度增加和（或）处理时间的延长，原代肝细胞的生长增殖受到明显的抑制，显微镜下，肝细胞生长密度也随之显著下降并最终出现空泡现象。10mM的氨浓度是理想的建模浓度。1.2氨对肝类细胞和非肝类细胞增殖和凋亡的影响（1）氨抑制肝类细胞的生长和增殖，尤其是原代肝