高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作分子机制的初步研究

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1、分类号：R6单位代码：10752密级：公开学号：201200213宁夏医科大学硕士研究生学位论文高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作分子机制的初步研究APreliminaryStudyoftheMolecularMechanismsofHyperglycemiaAggravatethePost-strokeEpilepsyafterCerebralIschemia学位申请人：宋祖耀指导教师：孙涛教授申请学位门类级别：医学专业名称：外科学研究方向：癫痫基础与临床研究所在学院：临床医学院论文完成日期：二〇一五年三月

2、宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeAPreliminaryStudyoftheMolecularMechanismsofHyperglycemiaAggravatethePost-strokeEpilepsyafterCerebralIschemiaStudent’sName:SongZuyaoSupervisor:SunTaoProfesserSubjectCategory:MedicineMajo

3、r:SurgerySpecialty:BasicandclinicalstudyofEpilepsyCollege:ClinicalInstituteCompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要高血糖加重脑缺血卒中后癫痫发作分子机制的初步研究摘要目的明确高血糖对大鼠脑缺血卒中后癫痫发作情况，以及对脑缺血卒中后癫痫大鼠脑组织损伤的影响；探讨mTOR信号通路与高血糖增加脑缺血卒中后癫痫的关系。材料和方法健康SD雄性大鼠，体重220-250g，由宁夏医科大学动物中心提供。

4、安静环境下饲养，给予充足洁净的水和摄食。将大鼠随机分成5组：假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组、高血糖﹢脑缺血组，每组10只：①假手术组：只分离双侧颈总动脉和迷走神经而不做结扎；②空白对照组：不予处理；③高血糖组：通过腹腔注射STZ建立高血糖模型；④脑缺血组：利用结扎双侧颈总动脉加低血压（2VO）的方法建立脑缺血模型；⑤高血糖﹢脑缺血组：通过腹腔注射STZ建立高血糖模型，常规饲养4周后，利用结扎双侧颈总动脉加2VO的方法建立脑缺血模型。脑缺血后观察各组大鼠行为变化和监测脑电变化；予脑缺血后24h后分

5、别断头取脑，剥离海马组织，予﹣80℃冻存和灌注取脑进行石蜡包埋。通过TUNEL观察大脑神经元损伤状况；通过Wstern-Blot、PCR和免疫组化检测海马mTOR、p-mTOR表达情况。实验结果的数据采用均数±标准差（xs）表示，数据分析采用单因素方差分析。先行方差齐性检验，组间差异统计学意义比较采用LSD-t检验，以p≤0.05为差异有统计学意义。结果①模型建立：高血糖组在腹腔注射STZ后，10只大鼠中有9只达到了实验要求（血糖浓度>12mmol/l），高血糖﹢脑缺血组大鼠血糖浓度全部达到实验要求。常

6、规饲养4周后，对高血糖﹢脑缺血组大鼠建立脑缺血模型，其中8只出现癫痫发作，1只死亡。然后脑缺血组大鼠建立脑缺血模型，其中1只出现癫痫发作，1只大鼠死亡。②行为学表现：高血糖大鼠在脑缺血10h左右出现癫痫大发作。发作最初，大鼠表现为胡须抖动、面部抽搐、眼睛紧闭、流涎和牙齿节律性咀嚼，随后会出现全身抖动、抽搐、站立并向后倾倒，发作剧烈者，会表现为在笼中四处逃窜，甚至出现跳跃。③电生理监测：脑缺血组大鼠出现了异常脑电，而高血糖﹢脑缺血组大鼠出现了宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要典型的癫痫波型，脑电中表现有

7、阵发性的高幅波形，并且具有癫痫波所特有的棘-慢波和多相棘波等波形，同时频繁出现多发棘波。④TUNEL：假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组和高血糖﹢脑缺血组的阳性细胞数分别为9.0±0.82、6.0±0.81、19.7±1.24、24.7±1.69、41.3±1.70。高血糖﹢脑缺血组与、高血糖组和脑缺血组之间具有统计学意义（p<0.01），脑缺血与假手术组、空白对照组、高血糖组之间具有统计学意义（p<0.05），高血糖组与假手术组、空白对照组之间具有统计学意义（p<0.01），而假手术组与空白对照组

8、之间无统计学意义（p﹥0.05）。结果表明高血糖不仅能够造成正常大鼠神经元的损伤，而且还能加重脑缺血大鼠海马神经元的损伤。⑤免疫组织化学：神经元胞浆呈棕黄色为阳性。p-mTOR在假手术组、空白对照组、高血糖组、脑缺血组和高血糖﹢脑缺血组中的阳性细胞数为：19.33±1.25、.15.67±1.24、51.33±2.87、44.33±1.69、31.33±1.26。高血糖组、脑缺血组和高血糖﹢脑缺血组与假手术组和空白对照组之间p