马铃薯增强子捕获系的创建及鉴定

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1、分类号：密级：公开UDC：编号：20150901020612012级攻读硕士学位研究生毕业论文马铃薯增强子捕获系的创建及鉴定Constructionandidentificationofpotatoenhancertrappingbank指导教师：杨永智副研究员学生姓名：张超学科专业名称：作物遗传育种研究方向：马铃薯基因工程学院(系、部)：农牧学院二零一五年五月QinghaiUniversityMasterDissertationConstructionandidentificationofpot

2、atoenhancertrappingbankSupervisor:YangYongzhiCandidate:ZhangChaoAcademicMajorApplidedfor:CropgeneticsandbreedingSpecificMajor:ThepotatogeneticengineeringCollege(Department):CollegeofagricultureandanimalhusbandryMay,2015独创性声明本人声明所p.交的学位论文圮我个人在导师指导齐进行的研

3、宂I:作及取得的研宄成圯尽我所知，除义屮已经标明引用的的容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发及戌撰写过的研宂成果。纣木文的研宂做出贡献的个人和粜体，均己/i:文中以明确力式丨#化木人完全念i»到本声明的法作结泶山本人水扔.学位论文版权使用授权书木学位论文作荇完全/解学校有关保ffl.使用学位论文的规5ir,即：学校苻权保阐力：I«Jw家ff关郎门或机构送交论文的s卬件和电〒•版，允许论文被作阅和借阅》木人授权I4I海大学大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据庳进行检索，可p采用影印

4、、缩印成扫描等制手段保存和汇编本学位论文.本论文尿于：保密口不保(请在相应方框内打"V"),在年解密后适用本授权书，学位论文作者签名:栴导教师签名：青海大学硕士学位论文摘要摘要马铃薯已在2014年成为我国作为重要的战略储备主粮之一，而马铃薯的测序工作也于2011年7月完成。测序的马铃薯材料为双单倍体马铃薯材料DM1-3-516-R44(DM)和杂合二倍体马铃薯材料RH89-039-16(RH)。基于测序成功的基础上，世界各国对马铃薯相关功能基因组学的研究将全面展开。本研究利用根癌农杆菌介导的遗传转

5、化法，将已成功构建的增强子捕获T-DNA双元载体导入马铃薯植株中，从而获得转基因植株，并对突变株系进行筛选和分析。同时结合已经发布的马铃薯基因组的测序数据，开展对马铃薯功能基因组学的研究。为后续建立增强子捕获系奠定基础，并加快马铃薯功能基因的相关研究。本研究在两年时间内取得了以下进展：1.创建了双单倍体马铃薯DM的再生体系。对马铃薯茎段、叶片进行脱分化、再分化直接得到健康植株。用于马铃薯茎段愈伤组织诱导的培养基为（MS+IAA0.5mg/L+6-BA2.5mg/L）；用于马铃薯叶片愈伤组织发生的培

6、养基为(MS+NAA1.0mg/L+6-BA1.0mg/L)；用于马铃薯愈伤组织分化不定芽的培养基为（MS+6-BA2mg/L+GA30.1mg/L）。2.创建了杂合二倍体马铃薯RH的再生体系。对马铃薯茎段、叶片进行脱分化、再分化直接得到健康植株。用于马铃薯茎段愈伤组织诱导的培养基为（MS+2,4-D0.5mg/L+ZT1.0mg/L）；用于马铃薯叶片愈伤组织发生的培养基为(MS+NAA1.0mg/L+ZT1.0mg/L)；用于愈伤组织分化不定芽的培养基为（MS+ZT2mg/L+GA310mg/L

7、）。3.优化了农杆菌转化双单倍体马铃薯DM的条件。将马铃薯茎段、叶片放入愈伤组织诱导预培养基中培养10d；利用OD600为0.3的农杆菌侵染10min，并放入愈伤诱导培养基中共培养3d；将共培养的组织清洗后放入含有300mg/L的头孢噻肟钠(Cef)和8mg/L的潮霉素(Hyg)的愈伤组织诱导预培养基中，培养10d即得到较好的愈伤组织；将较好的愈伤组织放入含有相应抗生素的分化培养基中培养20d即产生不定芽。4.利用含有潮霉素的基础培养基对不定芽进行初步筛选，得到110株可生根的材料。利用潮霉素引物

8、对生根材料进行PCR检测，得到30株转化植株。5.利用real-timePCR对转化株系外源基因进行拷贝数分析，得到2个拷贝的1株，单拷贝的29株。I青海大学硕士学位论文摘要关键词：马铃薯再生体系农杆菌转化增强子捕获拷贝数II青海大学硕士学位论文AbstractAbstractPotatoeswillbecomeaveryimportantstrategicreservestaplefoodinChinain2014,andtheirsequencinghadbeenfinishe