福建马铃薯a病毒的分子鉴定及检测技术

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2004,12渊1冤院90~95·研究论文·福建马铃薯A病毒的分子鉴定及检测技术*吴兴泉陈士华魏广彪吴祖建谢联辉**（福建农林大学植物病毒研究所，福州，350002）摘要：依据马铃薯A病毒（,PVA）外壳蛋白（coatprotein,）基因核苷酸序列及氨基酸序列对福建省PVA进行了鉴定。研究结果表明，利用PVA序列结合系统进化树分析不但可对PVA进行准确的鉴定，而且可进行不同分离物间分子差异性分析。利用病毒特异性引物建立了PV

2、A的反转录-聚合酶链式反应（reversetranscription-polymerasechainreaction，RT-PCR）技术，以DIG标记的PVA基因为探针建立了核酸斑点杂交技术（nucleicacidspothybridization,NASH），并对它们分别进行了改进。调查结果表明：PVA在福建省广泛分布，发病率最高可达80%以上。当地农家种可能是田间PVA的主要来源。关键词：马铃薯A病毒;分子鉴定;检测;发生;分布MolecularIdentificationandDetectionMeth

3、odofWUXing-QuanCHENShi-HuaWEIGuang-BiaoWUZu-JianXIELian-Hui**(PlantVirologyInstitute,FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou350002,China)Accordingtothenucleotideandaminoacidsequencesofcoatprotein（CP）,the(PVA)wasidentifiedinFujian.Basedonthephylogeneti

4、ctreeandsequenceanalysis,wecouldidentifyPVAandanalyszethedifferenceofPVAisolates.UsingthePVAspecificprimers,theRT-PCRdetectionmethodwasestablished.UsingDIGlabeledPVAgeneasprobe,nucleicacidspothybridization(NASH)detectionmethodwasestablished。Andthesetwometho

5、dswereimprovedtoo.TheinvestigationresultshowedthatPVAdistributedwidelyinFujian,andthehighestdiseaserateofPVAcouldreach80%.Thelocalvaritymightbethemainvirusresourceinfield.;molecularidentification;detection;occurrence;distribution马铃薯A病毒（，PVA）是马铃薯子鉴定与检测技术对研究该

6、病毒发生、分布与危害Y病毒属（）成员。PVA侵染马铃薯后可造等不但具有理论意义，而且具有较大的实用价值。目成减产40%以上，是马铃薯生产上危害较重的病毒前在我国尚无相关的报道。之一。该病毒可随种薯传播，并随种薯的种植而定1材料和方法植。由于至少有7种蚜虫以非持久性的方式传播该病毒，而这些蚜虫在我国内又很普遍，因此该病毒的1.1酶和试剂扩散可能性很大，具有较高流行风险，并具一定的检实验所用的限制性内切酶、反转录酶、RNA酶[1][2,3]疫重要性。迄今PVA在国内报道极少，它在我抑制剂、DNA聚合酶、植物RNA

7、提取试剂盒、国的发生和分布情况尚无系统研究。目前我国马铃dNTP、地高辛标记分子探针合成试剂盒和DNA纯薯病毒的检测鉴定主要以免疫学检测技术为主，但化试剂盒分别购自上海生工生物技术有限公司、未见有PVA的商业抗血清，这可能是我国对PVABoehringer公司和Promega公司,克隆载体采用研究滞后的原因。因此建立PVA的快速、准确的分Promega公司的pGEM-TEasyVectorSystem。*基金项目：福建省农业厅和国家教育部基金资助（00183）。吴兴泉：男，1970年生，博士。**通讯作者。A

8、uthorforcorrespondence.E-mail:.收稿日期:2002-12-20接受日期:2003-02-13PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.cn第1期吴兴泉等：福建马铃薯A病毒的分子鉴定及检测技术911.2毒源的获得机六聚体引物（10mol/L）2.5滋L、反转录酶1滋L，病毒样品采自福建省马铃薯