食品中苯巴比妥快速检测方法的研究

《食品中苯巴比妥快速检测方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：密级：UDC：学号：405605112081南昌大学硕士研究生学位论文食品中苯巴比妥快速检测方法的研究ThedevelopmentofrapiddetectionofmethodforPhenobarbitalinfood王江录培养单位（院、系食品学院指导教师姓名、职称：范青生研究员余宙副教授申请学位的学科门类：理学学科专业名称：营养与食品卫生学论文答辩R期：2015年5月评阅人:2015年5月、学位论文独创性声明木人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宂成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢

2、的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的村料。与我一同X作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）:签字円期:%[T年多月4曰二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学冇关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

3、本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表.并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密’年月后公开)摘要摘要苯巴比妥是一类精神药品，常用于镇静和催眠。由于利益驱使，一些不法分子将其非法添加在助眠类保健食品中，长期食用后，苯巴比妥会在体内蓄积，对人体健康造成威胁。因此，亟需开发简便、快速、高灵敏度的苯巴比妥检测方法。本论文在此领域开展了以下研究

4、：人工合成苯巴比妥完全抗原并进行鉴定。对苯巴比妥结构进行修饰，合成含有氨基和羧基的苯巴比妥半抗原，经重氮法和碳二亚胺法与BSA和OVA制备苯巴比妥人工抗原。通过TLC、质谱、核磁对苯巴比妥半抗原进行鉴定，并采用紫外扫描对人工抗原进行结构鉴定，通过动物免疫对人工抗原进行生物学鉴定，使用ELISA对得到的抗血清进行鉴定分析。结果表明：苯巴比妥半抗原已成功合成，苯巴比妥与BSA、OVA偶联成功，PAPB-BSA偶联比为23.20:1，PCPB-BSA偶联比为15.44:1，PAPB-OVA偶联比为10.91:1。动物免疫表明，免疫的10

5、只小鼠的效价均在103以上，且5号小鼠的抗血清抗苯巴比妥IC50为95.49ng/mL。本实验成功合成了苯巴比妥人工抗原，为进一步制备苯巴比妥的特异性抗体与建立苯巴比妥免疫学检测方法奠定了基础。用合成的两种人工抗原免疫BALB/C小鼠用以制备抗苯巴比妥单克隆抗体，三免后小鼠血清效价可达104，用PEG进行细胞融合，共获得4株可稳定分泌抗苯巴比妥单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水，并用BCA试剂盒测定其蛋白浓度。获得的抗体进行免疫特性分析，抗体亲和常8L/mol，IC5数为4.13×1050为10.76ng/m

6、L，抗体效价达到了10以上。该抗体除与苯巴比妥钠交叉反应率为87.84%外，与其他苯巴比妥结构类似物无交叉反应。胶体金免疫层析技术因为具有简便快捷、准确直观等优点而成为目前现场实时应用最广泛的一种诊断方法，与单克隆抗体技术的结合又使其具有良好的特异性和敏感性。本实验利用胶体金标记的抗苯巴比妥单克隆抗体为探针制备了检测苯巴比妥的胶体金免疫层析试纸条。利用柠檬酸三钠还原法制备粒径约为33nm的胶体金。在标记苯巴比妥单克隆抗体时，最佳pH值在7左右，最适标记抗体浓度为18μg/mL。经试验确定了NC膜抗原最佳包被浓度为1.5mg/mL，

7、驴抗鼠二抗最佳包被浓度为0.75mg/mL，同时两者按照0.75μL/cm喷膜。用组装好的试纸条检测苯巴比妥标准溶液，检测限30ng/mL。检测添加苯巴比妥的保健食III摘要品原料水提取样本时，检测限为30ng/mL。交叉反应实验说明所制备的试纸条与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥无交叉反应。在室温干燥条件下试纸条可以保存3个月以上，在不同批次和同一批次内有良好的重复性。本实验制备的试纸条方便、快捷，在15min内就可以直观的判断检测结果，适用于现场实时检测。关键字：苯巴比妥；人工抗原；单克隆抗体；胶体金；免疫层析试纸条IVABSTR

8、ACTABSTRACTPhenobarbitalispsychotropicdrugsofcategoryIandmostusedforsedationandhypnosis.Itwasoftenillegalityaddedtothehealth