重组质粒pchil-18-mage转染树突状细胞疫苗体外杀伤肝癌细胞的研究

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1、重组质粒pchIL-18-MAGE转染树突状细胞疫苗体外杀伤肝癌细胞的研究StudyoftransfectdendriticcellvaccineofrecombinantplasmidpchIL-18-MAGEinlivercancercellinvitro作者姓名：刁斌斌专业名称：免疫学指导教师：杨广民教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月28日中文摘要重组质粒pchIL-18-MAGE转染树突状细胞疫苗体外杀伤肝癌细胞的研究目的：肝癌是临床上常见的恶性肿瘤之一，采用手术、化疗及放疗等传统的治疗方法尽管显示一定的治疗效果，但仍

2、存在预后较差，易转移复发，生存率较低的问题。树突状细胞是众所周知的唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞，在肿瘤生物治疗中起到了重要作用,因此被广泛应用制备各种肿瘤疫苗。MAGE-1是MAGE家族成员之一，MAGE-1在正常组织中不表达（除睾丸和胎盘外），而在黑色素瘤和其它多种恶性肿瘤中均有不同程度表达，尤其在肝癌中高表达；IL-18是一种具有多种生物学活性的细胞因子，能够促进NK细胞的增殖和活化，诱导NK细胞分泌IFN-γ,可通过对IFN-γ和GM-CSF的诱导作用，促进MHCⅠ类分子的表达。因此IL-18可作为免疫佐剂增强疫苗的免疫

3、效果。本实验研究构建肿瘤相关抗原基因MAGE-1和细胞因子IL-18的重组质粒pcIL-18、pcMAGE-1和其共表达质粒pchIL-18-MAGE，将质粒转染DC中制备DC疫苗，以期促进NK细胞的增殖与活化，非特异性的杀伤肿瘤细胞；促进DC的成熟，有效的将抗原提呈给T细胞,更大地激发特异性的抗肿瘤免疫反应，靶向性杀伤肿瘤细胞。方法：构建共表达质粒pchIL-18-MAGE，体外培养树突状细胞，将以上重组质粒转染树突状细胞。RT-PCR和Westernblot验证基因在DC中的表达。用I流式细胞仪检测转染后DC细胞表型。经过转染DC刺激

4、的淋巴细胞作为效应细胞，未转染DC刺激淋巴细胞和单纯淋巴细胞为对照，检测靶细胞体外杀伤作用。ELISA法检测INF-γ分泌。结果：培养后，经显微镜和电镜观察，可见悬浮样生长的细胞呈树突样；PT-PCR和Westernblot鉴定，可见IL-18和MAGE-1基因在DC细胞中的表达；转染前、后DC细胞表面标志差异明显；转染DC与未转染DC均具有很强的刺激淋巴细胞增殖的能力；各转染组与未转染组比较，无论淋巴细胞增殖及IFN-γ产生能力均有显著性差异；pchIL-18-MAGE转染后DC细胞高表达DC83、CD1a、CD86、CD80、HLA-

5、DR等抗原，表现为成熟DC表型特征。共表达质粒转染的DC细胞诱导的CTL对肝癌细胞杀伤作用最强。结论：pchIL-18-MAGE转染DC细胞对MAGE-1+肝癌细胞杀伤作用明显。关键词：疫苗，肝癌，树突状细胞，MAGE-1，IL-18IIABSTRACTStudyoftransfectdendriticcellvaccineofrecombinantplasmidpchIL-18-MAGEinlivercancercellinvitroObjective:Toobservelethaleffectonlivercancercellsbyt

6、heDCstransfectedwithrecombinantplasmidpchIL-18-MAGE.Livercancerisoneofthemostprevalentmalignantdiseasesworldwide.Manylocoregionaltherapeuticapproaches,includingsurgicalresection,radiofrequencyablation(RFA),percutaneousethanolinjection(PEI),andtranscatheterhepaticarterialc

7、hemoembolization(TACE)havebeenappliedinthesearchforcurativetreatmentsforHCC.Unfortunately,thereisstillapoorprognosisandhighrecurrencerateoflivercancer.Dendriticcells(DCs)arethemostpotentantigen-presentingcells.TheimmunefunctionsofDCsinanumberoftumorshavebeenidentifid.DCva

8、ccinationisoneofthenewmodalitiesofimmunotherapyincancerthatposseslessfrequencyofcomplications,mi