转nramp1基因克隆牛的研制

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1、分类号：S854学校代码：10712UDC：602研究生学号：2010060337密级：公开5灶农林^教大学2015届攻读博士学位研究生学位（毕业）论文转基因克隆牛的研制学科专业：临床兽医学研究方向：动物胚胎工程研究生李倩指导教师：靳亚平教授完成时间：2015年5月中国陕西杨凌Classificationcode:S854Universitycode:10712UDC:602Postgraduatenumber:2010060337Confidentialitylevel:OpenDissertationforDoctorDegreeNorthwestAFUniv

2、ersityin2015PRODUCTIONOFANTI-MYCOBACTERIALCATTLEBYTRANSFERTHENRAMP1Major:ClinicVeterinaryMedicineResearchfield:TheAnimalEmbryoEngineeringNameofPostgraduate:QianLiAdviser:Prof.YapingJinDateofsubmission:April.2015YanglingShaanxiChina研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的博士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工

3、作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：ill时间：年6月3曰导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的博士研究生所呈交的博士学位（毕业）论文是在我指导下独立开展

4、研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。导师签名:时间：^人T年Z月彡曰关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕业）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕业）论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学位论文全

5、文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位（毕业）论文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人（包括研究生本人)未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、£文编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文

6、）研究生签名：时间：年《月3曰导师签名：时间：；^/_r年/月穸日转Nramp1基因克隆牛的研制摘要结核病是一种全球性的、人畜共患传染病，是严重危害养殖业和人类健康的重大疫病之一。由于没有有效的预防和根除方法，目前主要采用检疫-扑杀结合的方法。结核病的发生与机体的抗病力密切相关，因而，如何提高机体的抗结核能力一直是人们关注的焦点。近年来，病原-宿主相关作用机制研究的深入、基因编辑技术和动物克隆技术的快速发展，使抗结核牛羊的培育和生产成为可能。研究显示，机体对结核分支杆菌的抵抗力强弱与天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1（Nramp1）的表达存在量依赖性关系。因此通过转基因

7、手段来增强牛Nramp1基因表达，培育抗病种群，可成为控制牛结核病的一个新切入点。本研究分别克隆了秦川牛Nramp1开放阅读框及荷斯坦奶牛Nramp1基因启动子区（5’侧翼区-1483～+73）序列，构建了牛Nramp1吞噬细胞特异性真核表达载体，转染荷斯坦奶牛新生牛成纤维细胞，筛选阳性克隆作为核移植供体细胞，生产培育转Nramp1基因克隆牛，取得以下结果：1.基因克隆、载体构建与功能验证。以秦川牛外周血总RNA为模板PCR扩增Nramp1基因开放阅读框，获得的序列对比GenBank中的牛的相应的基因序列（GenBank序列号U12862.1），发现存在2个碱基差

8、异：第1个