胰腺癌前病变小鼠模型血清早期诊断microrna的筛选研究

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1、京诚如皆聲院临床医学专业学生毕业论文ｔ■（八年制）磅．藝讀．覇義Ｉ戶葬北京协和睦教务居謂獄巧．ｐ巧＾＊＾１２５：ｊＳ＿＾？８＾三人ｉＫｉｉｉｎｉｉｒｒ学校代码；１００２３学号：２００７０１０３１膜腺癌前病变小鼠模型血清早期诊断ｍｉｃｒｏＲＮＡ的筛选研究专业年级：北京协和医学院临床医学专业２００７级姓名；洪夏飞导师；赵玉沛（教授）北京胁和医学院临床学院（北京协和医院）基本外科完成日期：２０１５年６月目录中舖要３胃胃３＠３６＾方法３结果４结论４关键词４

2、ｔ５ＡｂｓｔｒａｃＢａｃｋｇｒｏｕｎｄ５Ｏｂｅｃｔｉｖｅ５ｊＭｅｔｈｏｄｓ６Ｒｅｓｕｌｔｓ６Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ７Ｋｅｙｗｏｒｄｓ７引胃８Ｋｒａｓ突变小鼠模型可模拟人膜腺癌变的全过程８血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ与疾病早期诊断９政１０一第部分：两种族腺癌前病变小鼠模型的建立１０研巧背景１０１材料及试剂０实验方法１２Ｓ果１７職２０誠２２－第二部分；膜腺炎癌前病变模型血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ巧片筛选２３研究背景２３２３材料和试剂２４实验

3、方法２７職２９３０鱗１第Ｈ部分：生物信息学对膜腺特异性ｍｉｃｒｏＲＮＡ的筛选３１研巧背景３１软件和数据库３１１实验方法３结果３２麻３６结ｉ３７ｆｅ第四部分ｃｒｏ３８：族腺癌前病变自然病程模型血清ｍｉＲＮＡ的验证研究背景３８材料和试剂３８实验方法３９结４Ｓ２４４结４５全文小结４６参考文献４７缩略词表５１综述５２参考文献５５麵５７独创性声明５８学位论文版权使用授权．５８２中文摘要背景族腺癌发病机制复杂，难

4、Ｗ早期诊断，临床上确诊膜腺癌患者的手术可切除率低，术后生存期相对其他肿瘤较短。然而，关于膜腺癌发病机制的研巧表明，膜腺癌的发生经历了相当长的过程，从获得关键的致病基因突变、逐渐发展为膜腺癌前病变、最终发展为膜腺癌，需要经历大约十年的时间。膜腺癌前病变如能早期诊断、及时治疗，可提高该疾病的治疗效果；然而，略床上缺乏早期筛查膜腺癌前病变的一标志物血清中稳定存在一。ＭｉｃｒｏＲＮＡ是种２２个碱基长度的核糖核酸，能在，是＾ｓＤ种潜在的血清诊断标志物。Ｋｒａｓ突变转基因小鼠通过肤腺细胞特异性启动子，６ｉ２Ｄ仅在膜腺细胞内产生具有致癌活性的Ｋｒａｓ突变蛋白；

5、该小鼠可自发经妨巧常膜＂ＷＳＤ腺－膜腺癌前病变－膜腺癌过程ｒａｓ。通过构建繁殖Ｋ突变小鼠，并在膜腺癌前病变阶段留取小鼠外周血清，通过ｍｉｃｒｏＲＮＡ芯片和实时定量ＰＣＲ的方法，定量测定ａｎｎＫｒａｓ小鼠外周血清中特异性高表达的ｍｉｃｒｏＲＮＡ，为临床筛选族腺癌前病变的候选分子。目的ｅｉｓＤ１．饲养Ｋｒａｓ转基因小鼠药物干预，培养族腺癌前病变自然病程组小鼠，无；Ｗ？２－族腺癌前．通过雨蛙化，诱导Ｋｒａｓ突变转基因小鼠产生族腺炎，培养膜腺炎病变组小鼠；３ｍｃｒｏ－ｍｃｒｏ．通过ｉＲＮＡ忍片，筛选出膜腺炎膜腺癌前病变中血清离表达ｉＲＮＡ；４

6、ｃｒｏＲＮ．通过生物信息方法，筛选出ｍｉＡ分子作为验证对象；５．通过实时定量ＰＣＲ，检测候选的ｍｉｃｒｏＲＮＡ在膜腺癌前病变血清的表达来量。方法ＷＺＤ１．通过剪取小鼠鼠患消化提取ＤＮＡ；再通过特异性引物，扩增Ｋｒａｓ突变基因和Ｃｒｅ重沮酶基因；进而确定小鼠基因型；ＷＳＤ２．通过腹腔注射雨蛙狀，诱导Ｋｒａｓ突变转基因小鼠产生族腺炎；再通过控制不－同注射时间段，得到不同程度的膜腺炎膜腺癌前病变过小鼠解剖，膜腺取材、；通固定－、脱水、包埋等步骤，将不同阶段膜腺炎膜腺癌前病变小鼠的组织进行保存；３３－．通过苏木精伊红染色，显微镜下随机取视野，并按

7、照国际通用的膜腺癌前病变评分系统对膊腺癌前病变进行评分。通过免疫組化染色，评价肤腺浸润的免疫细胞种类和数量；４．通过小鼠眼球后静脉取血，采集小鼠自然病程过程中外周清；５．通过ｍｉｃｒｏＲＮＡ芯片，对小鼠血淆中的ｍｉｃｒｏＲＮＡ丰度进行测定。通过严密的后－族腺癌前病变中高表达的血清ｍｃｒｏ期计算分析，筛选出膜腺炎ｉＲＮＡ指标；６血样中高表达的．通过生物信息方法，筛选出在膜腺癌或癌前病变的组织或ｍｉｃｒｏＲＮＡ；一７．通过实时定量ＰＣＲ的方法，对于巧片中筛选出的ｍｉｃｒｏＲＮＡ进行逐筛选