肾癌中pdgf-b的表达抑制肿瘤的生长和转移

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1、分类号：R73学校代码：10062密级：学号：2012602235硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：肾癌中PDGF-B的表达抑制肿瘤的生长和转移TITLEExpressionofPDGF-Binhibitsrenalcellcarcinomagrowthandmetastasis一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：王文玲指导教师：姚欣教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R73学校代码：10062密级：学号：2012602235学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：肾癌中PDGF-

2、B的表达抑制肿瘤的生长和转移TITLEExpressionofPDGF-Binhibitsrenalcellcarcinomagrowthandmetastasis一级学科：临床医学二级学科：肿瘤学论文作者：王文玲指导教师：姚欣教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书

3、本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：血小板衍生生长因子(PDGF)-B的表达能促进血管壁附近的周细胞募集，从而增加其结构上的稳定性。周细胞募集所致覆盖率增加可能导致抗血管新生药物产生耐药，因而，联合针对内皮细胞与周细胞联合靶向

4、治疗已经提出。但是，周细胞和内皮细胞是调节血管生成、稳定与重塑的中心环节，两者之间的相互作用是非常复杂的。在我们研究中，重点评估了由PDGF-B介导的周细胞募集这一作用对肾细胞癌(RCC)肿瘤生长和进展的影响。方法:1．将含有PDGF-B基因的质粒转染到ACHN细胞系(人类肾癌细胞系之一)，用Western-blotting来验证PDGF-B在ACHN细胞系的过表达。2．MTT实验来对转染PDGF-B的ACHN细胞OD值进行测量，从而分析肿瘤细胞ACHN增殖情况。3．用Western-blotting来测量VSMCs(壁细胞)和HUVECs(内皮细胞)细胞的磷酸化PDGFR-β(p-PDGF

5、R-β)表达水平。4．相关实验来分析ACHN细胞分泌PDGF-B对VSMCs(周细胞)和HUVECs(内皮细胞)功能的影响。FCM方法分析PDGF-B对VSMCs和HUVECs两种细胞周期分布的不同影响；Transwell实验检测PDGF-B对VSMCs和HUVECs两细胞的迁移能力影响；管腔形成实验来检测PDGF-B对VSMCs和HUVECs管腔形成能力影响。5．将PDGF-B转染的和空转染的ACHN细胞注射到小鼠的左侧腹股沟，通过每3天测量肿瘤直径来进行实验组与对照组肿瘤大小的比较。6．使用免疫组织化学(抗Ki-67)和组织形态学(HE染色)评估小鼠移植瘤的肿瘤细胞增殖和进展(浸润和转移

6、)。7．Microarray探讨VanAndel研究所中肾透明细胞癌患者PDGF-B表达对预后的影响。结果:1．Western-blotting结果显示，经过PDGF-B基因转染的ACHN细胞PDGF-B表达明显上调。2．MTT测定表明PDGF-B转染的ACHN与空转染的ACHN细胞的OD值之间I天津医科大学硕士学位论文没有显著差异(P>0.05)。3．与PDGF-B过表达培养基共培养后，VSMCs中可检测出p-PDGFR-β表达的上调。4．FCM分析表明，PDGF-B过表达组中，VSMCs往往更多倾向于S和G2/M期。PDGF-B过表达组中，VSMCs的迁移能力显著(P<0.001)大于另

7、外两组(加入空转染ACHN细胞培养基；加入PDGF-B抑制剂的ACHN培养基)。且只有在PDGF-B过表达的培养基中VSMCs方具有管腔形成能力。5．PDGF-B转染的肾癌细胞ACHN的移植瘤的肿瘤平均体积小于对照组(P=0.028)。6．免疫组化表明：PDGF-B过表达组的小鼠肿瘤细胞的Ki-67阳性表达细胞明显少于对照组(P=0.019)。PDGF-B过表达的肿瘤，只有一只小鼠存在肿瘤周围的软组织浸润。而