肺动脉平滑肌细胞stim1orai1相互作用初步研究

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1、分类号：R363学校代码:10392学科专业代码：100104学号:2120102569硕士学位论文肺动脉平滑肌细胞STIM1/Orai1相互作用初步研究ThepreliminaryresearchontheinteractionbetweenSTIM1andOrai1inpulmonaryarterysmoothmusclecells学位类型：医学硕士所在学院：基础医学院申请人姓名：潘东学科、专业：病理学与病理生理学导师：林德馨教授研究起止日期：2013年9月至2015年2月答辩委员会主席：郑志竑教授答辩日期：2015年6月2日二

2、○一五年六月学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明本人郑巫声明：所？交的位论文.足本人作导帅的指导F.独立进行研究1:作所取«的»实成I除文中ciiM丨引丨丨1的内?f外，本论文不含任Mtt•他个人或鬼体L!经发犮或淇％过的作品成!K•对本论文的研究做出1?要A献的个人和91体•均Lift文中以明确//式怀明•本人完令总识到本小明的法川结泶H丨本人准択.作各签名:lakfpf)ntMiYfiiir;r学位论文版权使用授权书本7(、7论文作片完个校奵义Kffl、tt川学ft论文的规学校保fflJI向关部N或机构（

3、如《家RHHfi、中PI学术期刊电子杂忐社的《屮R优秀M顷i:_?:ft论文致flW>，屮[M科学技术丨,Tfl研究所的《屮W学位论文仝文致锯痄》等）送交论义的K印件和屯f版，允许论文被氺人授权描1EK科大学"〖以将本7:位论文的全部或部分rt奔编入有关数据库进丨f检索，"1以采川彩卬、缩卬或彳丨描等制T段保和汇3S本学位论文.『《束的7ft论4;G办砰wxm密G适川木授权15>7^/rf»:i"h7<^r■!••L)rh目录英文缩略词……………………………………………………………5中文摘要……………………………………………………

4、…………6英文摘要………………………………………………………………7引言……………………………………………………………………8实验材料…………………………………...…………………………111动物及细胞株……………………...…………………………112实验器材…………………………...…………………………113主要试剂…………………………...…………………………124试剂配制…………………………...…………………………13实验方法…………………………………...…………………………171慢病毒载体构建与鉴定…………...…………

5、……………..171.1PCR扩增目的基因DNA…………...………………………171.2双酶切载体…………………………………………………181.3目的基因与载体连接和重组载体鉴定…………………….181.4慢病毒包装…………………………………………………192STIM1/Orai1在大鼠PASMCs中的表达………………….192.1分离和培养PASMCs……………………………………...192.2慢病毒感染PASMCs………………………………………202.3WesternBlot检测STIM1/Orai1蛋白的表达……………...

6、202.4细胞内钙测定………………………………………………213STIM1/Orai1蛋白相互作用………………………………...223.1免疫荧光共定位……………………………………………223.2免疫共沉淀…………………………………………………23实验结果…………………………………...…………………………251慢病毒载体构建和鉴定…………………………………….251.1PCR扩增基因DNA………………………………………...251.2重组载体酶切鉴定…………...……………………………251.3重组载体测序………………………………

7、………………262STIM1/Orai1在大鼠PASMCs中的表达………………….262.1病毒载体在PASMCs中的感染……………………………262.2病毒载体STIM1/Orai1蛋白在PASMCs中的表达...……272.3钙荧光测定………………………………………………….293大鼠PASMCs中STIM1/Orai1的相互关系…………………303.1STIM1/Orai1在PASMCs的定位……………………………303.2STIM1/Orai1相互结合作用………………………………..31讨论.…………………………………………

8、…..……………………33结论.………………………………………………..…………………37参考文献………….…………………………………..………………38致谢……………………………………………….……………..……42附录………………