细粒棘球蚴重组抗原eg10和mmdh致树突状细胞免疫耐受的机制研究

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：20120127宁夏医科大学硕士研究生学位论文细粒棘球蚴重组抗原Eg10和mMDH致树突状细胞免疫耐受的机制研究ThemechanismofimmunetolerancecausedbyEchinococcusgranulosusrecombinantantigenofEg10andmMDH学位申请人：吕士玉指导教师：赵巍教授合作指导教师：王娅娜副教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：分子遗传所在学院：检验学院论文完成日期：二〇一五年四月宁夏医科大学研

2、究生院NingxiaMedicalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeThemechanismofimmunetolerancecausedbyEchinococcusgranulosusrecombinantantigenofEg10andmMDHStudent’sName:LvShiyuSupervisor:ZhaoWeiprofessorAssistantsupervisor:WangYanavice-professorSubjectCategory:Scie

3、nceMajor:ClinicalexaminationdiagnosticsSpecialty:MoleculargeneticsSchool:InstituteofLaboratoryMedicineCompletionDate:Apr.2015宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要细粒棘球蚴重组抗原Eg10和mMDH致树突状细胞免疫耐受机制的研究摘要目的初步明确细粒棘球蚴重组抗原Eg10和mMDH免疫小鼠产生的免疫耐受机制。方法1.体外培养小鼠骨髓来源的树突状细胞（Dendriticcell，DC），用Eg10和mMDH

4、体外刺激DCs，通过扫描电镜观察DCs的形态变化，细胞免疫荧光观察DCs表达吲哚胺2,3双加氧酶（Indoleamine2,3-dioxygenase，IDO）的水平；2.利用IDO抑制剂1-甲基色氨酸（1-Methyl-tryptophan，1-MT）处理DCs3h，用来抑制IDO的表达及酶活性，然后用重组抗原Eg10和mMDH体外刺激DCs，+++通过混合淋巴细胞反应检测DCs刺激CD4T细胞增殖及诱导CD4CD25FOXP+3调节性T细胞（RegulatoryTcell，Treg）生成的能力；Q-PCR检测DCs中

5、多种细胞因子的表达；流式细胞术(FCM)检测DC表面分子CD80/CD86、MHCII、CD40的表达情况。结果1.重组抗原Eg10和mMDH不能刺激DCs表面树突的生成，DCs呈现不成熟状态；2.重组抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，IDO的表达增强，上清中犬尿氨酸的含量也升高，且1-MT能特异性降低IDO的表达水平和酶活性；+3.与1-MT未处理的mMDH组相比，1-MT处理的mMDH组中DCs刺激CD4T+++细胞增殖的能力升高，诱导CD4CD25FOXP3Tregs生成的能力降低，差异有统计学意义；而Eg10组

6、对1-MT的反应不明显；4.重组抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，TNF-α、IL-6、IL-10mRNA水平的表达呈不同程度的升高，1-MT处理的抗原组TNF-αmRNA表达升高，IL-6、IL-10mRNA表达降低；5.重组抗原Eg10和mMDH刺激DCs后，细胞表面分子的表达水平较低，1-MTI宁夏医科大学硕士学位论文中文摘要处理并不能提高表面分子的表达水平。结论1.细粒棘球蚴重组抗原Eg10和mMDH体外刺激小鼠骨髓来源的DCs，不能使+其发育成熟，DCs刺激CD4T细胞增殖的能力较弱；2.细粒棘球蚴重组抗原m

7、MDH通过刺激DCs表达高水平的IDO，引起免疫耐受。3.细粒棘球蚴重组抗原Eg10不是通过刺激DCs表达IDO引起免疫耐受的，可能存在其他机制。关键词细粒棘球蚴，Eg10，mMDH，树突状细胞，IDOII宁夏医科大学硕士学位论文英文摘要ThemechanismofimmunetolerancecausedbyEchinococcusgranulosusrecombinantantigenofEg10andmMDHABSTRACTObjectiveToidentifythemechanismofmouseimmuneto

8、lerancecausedbyEchinococcusgranulosusrecombinantEg10andmMDH.Methods1.Weinvestigatedtheresponseofmonocytederivedmurinedendriticcells(DCs)tobothrecombinantantige