竹子ped14基因克隆和内源独脚金内酯检测方法研究

《竹子ped14基因克隆和内源独脚金内酯检测方法研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号S795密级公开UDC630硕士学位论文竹子PeD14基因克隆和内源独脚金内酯检测方法研究作者姓名：胡骁伟指导教师：方伟教授李国栋讲师学科专业名称：森林培育研究方向：竹林培育与利用所在学院：林业与生物技术学院论文提交日期：2015年6月3日浙江农林大学2015年6月3日ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterMolecularcloningofPeD14andstudyondeterminationofendogenousstrigolactoneinbambooCandidate:HUxiaoweiAdviser:FAN

2、Gwei,ProfessorAssociateSupervisor:LIguodong,LectureSpecialty:SilvicultureDateofSubmission:April25,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaJune,2015独创性声明本人声明，所呈交的学位论文，是受国家科技支撑计划（2013BAD20B02），浙江省重中之重林学一级学科开放基金项目（KF201305）项目资助，在方伟教授和李国栋讲师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了

3、答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的材料。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密,本学位论文属于不保密。□（请在方框内打“√”）学位论文作者亲笔签名：日期：指导教师

4、亲笔签名：日期：摘要竹子从属于禾本科(Gramineae)竹亚科(Bambusoideae)，是典型的无性系繁殖植物类群，靠竹株基部芽眼(丛生竹)或延伸生长的地下茎侧芽(散生竹)进行更新生长。竹子地下茎侧芽的萌发和生长受到包括养分、激素在内的许多因素影响和调控，其中可溶性糖和氮磷元素是养分中重要部分，而独脚金内酯(strigolactones,SLs)是新近发现的具有抑制植物侧枝生长发育活性的一类植物激素，可能参与竹笋萌发的调控。本研究监测毛竹竹鞭及竹叶季节性养分变化，探讨竹子地下茎侧芽萌发与生长对养分的需求特征；利用外源独脚金内酯类似物处理竹子幼苗，研究竹子对SLs响应；在毛竹中克隆到一个独

5、脚金内酯受体蛋白基因D14的同源基因PeD14，分析了其基因结构和组织表达特性；最后用超高效液相色谱(UPLC)方法测定竹子内源5-脱氧独脚金醇，初步建立了竹子中独脚金内酯的检测方法，取得主要研究结果如下：1.毛竹竹叶和竹鞭的可溶性糖含量在7月和10月均较低，1月竹叶和竹鞭的可溶性糖含量大幅增加，增幅达103.6%和52.8%，4月竹叶和竹鞭的可溶性糖含量稍微下降。竹叶和竹鞭中氮磷含量变化趋势相近，10月下降，1月稍微上升，4月又回落，除竹鞭中的磷含量变化较大外，竹叶和竹鞭的氮磷含量变化幅度相对平缓；2.外源GR24(5μM)处理绿竹(Bambusaoldhami)幼苗发现，与对照组相比，2周

6、和4周时处理组芽平均增值数减少了95.83%和78.43%；3.通过通过同源克隆扩增得到毛竹(Phyllostachysedulis)PeD14cDNA全长918bp序列，基因结构中含有一个内含子，编码305个氨基酸。采用实时荧光定量PCR分析PeD14基因在不同部位的表达发现，PeD14基因在芽中表达最高，鞭最少；4.PeD14拥有一个由7个β-片层组成的核心，被大约7个主要的α-螺旋围绕，其顶部是由4个α-螺旋组成的顶盖，顶盖下是一个大的疏水空腔，其中催化三联体在的位置为Ser134、Asp255和His284。毛竹PeD14基因编码的氨基酸与单子叶植物相似度>87%，与双子叶植物的D14

7、蛋白的相似度>60%，单子叶植物在N-端比双子叶植物多34-50个不等氨基酸；5.应用超高效液相色谱法分离检测5-DS发现其最大吸收峰在237nm，但该波长下目标峰的峰形展宽比较严重，基线发生漂移，250nm下基线、峰形均较好，适合作为检测波长，甲醇作为流动相基线较乙腈更稳定，甲醇中添加0.25%的甲酸能改善峰形，乙酸乙酯作提取剂，利用超声辅助提取可节约前处理时间并提高提取率，固相萃取纯化可有效减