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《cmv甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、3CMV甜瓜分离物外壳蛋白基因的克隆及植物表达载体的构建1,213311311马新艳,古勤生,刘丽锋,李宁,杨民和,彭斌,李莉(1.中国农业科学院郑州果树研究所生物技术中心,河南郑州450009;2.江西农业大学农学院,江西南昌330045;3.福建师范大学生物工程学院,福建福州350007)CloningandConstructionofPlantExpressionoftheCoatProteinGeneofaMelonIsolateofCucumberMosaicVirus1,213311311MAXin2yan,GUQin2sheng,LIULi2feng,
2、LINing,YANGMin2he,PENGBin,LILi(1.ZhengzhouInstituteofPomology,CAAS,Zhengzhou450009,China;2.CollegeofAgriculture,JiangxiAgriculturalUni2versity,Nanchang330045,China;3.CollegeofBiologicalEngineering,FujianNormalUniversity,Fuzhou350007,China)Abstract:ThecoatproteingeneofCucumbermosaicviru
3、s(CMV)frommelonisolate(CH99/90)wasamplifiedbyRT2PCRfromthetotalRNAofinfectedzucchinileavesandclonedintopUCm2Tvector.Thegeneconsistedof657nucleotidesencoding218putativeaminoacids.NucleotidesequencealignmentsshowedthattheCPgeneshared92.2%～93.9%homologywiththatofCMVsubgroupIstrains,wherea
4、sonly76.8%～77.8%homologywiththatofCMVsubgroupIIstrains.Thenucleotidesequenceshared91.8%～93.4%homologywithCMVisolatepreviouslyreportedfromChinaexceptforXBisolate.ThismelonisolatewasclassifiedintosubgroupIbasedonthesedata.Thegenewasconstructedintoplantexpressionvectorbyusingintermediatev
5、ectorpJIT163(recombinantplasmiddesignatedaspBCP).TherecombinantplasmidwastransferredintocompetentcellsofAgrobacteriumtumefaciensLBA4404.Transformationofthegeneintowatermelonisundertaking.Keywords:CMV;Chineseisolate;Coatproteingene;Sequenceanalysis;Plantexpressionvector摘要:从河南省临颖县采集的病毒感染
6、的甜瓜样本经ELISA检测和接种分离获得黄瓜花叶病毒(Cucunbermosaicvirus,CMV)分离物。把该分离物接种西葫芦,从发病的叶片中提取总RNA,并以此为模板经RT2PCR扩增获得CMV的外壳蛋白(cp)基因,将其克隆到pUCm2T质粒上。经序列测定和分析,结果表明该cp基因由657个核苷酸组成,编码218个氨基酸。其核苷酸序列与黄瓜花叶病毒亚组I的分离物有较高的同源性,达92.2%～93.9%,与亚组II的同源性仅为76.8%～77.8%,与我国报道的CMV分离物的cp基因序列比较,除香蕉株系XB外核苷酸序列的同源性达91.8%～93.4%。根据这些
7、分析,该CMV分离物属于亚组I。将cp基因通过中间载体pJIT163定向克隆到植物表达载体pBINPLUS中(重组双元载体质粒命名为pBCP),并经冻融法导入农杆菌中,经PCR及酶切鉴定,证实质粒已被导入。利用该植物表达载体对西瓜的遗传转化工作目前正在进行中。关键词:CMV;中国分离物;外壳蛋白基因;序列分析;植物表达载体中图分类号:S432.1文献标识码:A文章编号:100325125(2005)0320307204[1]黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)之一。该病毒分类上属于雀麦花叶病毒科(Bro2为世界性分布病毒,能侵染包括单子
