线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病大鼠心肌损伤Notch1信号通路的作用及机制研究

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1、硕士学位论文线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病大鼠心肌损伤Notch1信号通路的作用及机制研究论文题目：EffectandmechanismofmitochondrialALDH2onNotch1signalpathwayinmyocardialinjuryindiabeticrats研究生姓名:陶敏指导教师：张恒主任医师学科专业:内科学研究方向:冠心病论文工作时间:2016年1月至2018年3月学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容

2、外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属蚌埠医学院。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：_____保密期限为_____年。学位论文作者签名：导师签名：日期：日期

3、：本课题受以下基金资助：国家自然科学基金资助项目（NO.81550036）安徽省教育厅重点项目（NO.KJ2016A484）目录1.中文摘要……………………………………………….…………………12.英文摘要…………………………………………………….……………43.论文正文引言……………………………………………………………………..9材料与方法…………………………………………………………….11实验结果……………………………………………………………….24讨论…………………………………………………………………….41结论……………………………………………………………

4、……….48参考文献……………………………………………………………….494.致谢……………………….………..…………………………………….595.附录附录A中英文缩略语对照……………………………………..….......60附录B主要试剂配制…………………………………………..….......61附录C个人简历及已发表论文………………………………….....…65附录D文献综述…………………………………………………….....66线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病大鼠心肌损伤Notch1信号通路的作用及机制研究中文摘要目的：观察线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病心肌损伤中No

5、tch1信号通路的影响，探讨其发挥作用的相关分子机制。方法：腹腔注射链脲佐菌素（55mg/kg）进行糖尿病大鼠模型的复制，分成正常对照组（Con）、糖尿病4W组（DM4W）、糖尿病8W组（DM8W）和糖尿病8W+ALDH2激动剂乙醇组（DM+EtOH）。造模成功1周后DM+EtOH组大鼠予以2.5%乙醇日常饮用，1周后改浓度为5%的乙醇，持续8周。测定不同时间点各组小动物超声大鼠心功能；8周后对各组大鼠行在体心肌缺血/再灌注（I/R）模型复制，分为Con8WI/R组、DM8WI/R、DM+EtOH8WI/R。测量大鼠体重、心脏重量，计算出心系数；自动生化分析仪测定

6、血浆肌酸激酶（creatinekinase，CK）和肌酸激酶同工酶（creatinekinaseisozyme，CK-MB）水平；试剂盒检测大鼠心肌组织细胞色素C（cytochromeC，CytC）及TNF-a水平变化；HE染色后光镜下观察大鼠心肌组织及细胞形态；Masson染色及PAS染色观察大鼠心肌纤维化情况；WesternBlotting测定心肌组织ALDH2、Notch1、Hes-1及Jagged-1蛋白表达；免疫组织化学法检测大鼠心肌组织ALDH2、Notch1、Hes-1及Jagged-1的蛋白。在动物模型的基础上，取1~3日龄的SD乳鼠的心室肌进行心

7、肌细胞的原代培养，分为正常对照组（N）、正常+ALDH2激动剂Alda-1组（N+Alda-1）、高糖组（HG）、高糖+Alda-1组（HG+Alda-1）、高糖+Alda-1+ALDH2抑制剂Daidzin组（HG+Alda-1+Daidzin）、高糖+Daidzin组（HG+Daidzin），高糖+Alda-1+Notch1抑制剂DAPT组（HG+Alda-1+DAPT）；在心肌细胞原代培养的基础上，对细胞进行缺氧复氧处理模拟心肌缺血再灌注损伤过程。免疫荧光鉴定心肌细胞；CCK-8法检测各组心肌细胞活力；采用AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒通过流

8、式细胞仪技