瑞香素联合dc疫苗抗小鼠移植性肿瘤h22效应的实验研究

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1、分类号：密级：UDC：学号：406520212352南昌大学硕士研究生学位论文瑞香素联合DC疫苗抗小鼠移植性肿瘤H22效应的实验研究ExperimentalstudyonthetherapeuticeffectofdaphnetincombinedwithdendriticcellsvaccineonH22-bearingmice李伟培养单位（院、系）：南昌大学基础医学院指导教师姓名、职称：曾小平副教授闵卫平教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：免疫学论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：评阅人：2015年5月一、学位论文独创性声明本

2、人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文

3、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）摘要摘要目的:观察瑞香素联

4、合树突状细胞（DC）疫苗对小鼠H22肝癌移植瘤抗肿瘤免疫效应及其对荷瘤小鼠肿瘤细胞中抑凋亡基因Bcl-2及促凋亡基因BaxmRNA表达的影响，初步探讨瑞香素联合DC疫苗抗肿瘤的可能机制。方法:1、采用MTT法检测不同浓度瑞香素对人肝癌HepG2细胞和小鼠肝癌H22体外增殖的抑制作用；2、体外培养DC并在倒置显微镜下观察细胞形态，应用反复冻融法制备的肿瘤细胞全细胞抗原冲击DC制备DC肿瘤疫苗；3、瑞香素联合DC疫苗的体内抑瘤作用：建立小鼠H22肝癌荷瘤模型，将实验动物随机分为荷瘤对照组、5-Fu治疗组、瑞香素组、DC疫苗组、瑞香素联合DC疫苗组，

5、另设健康对照组，每组8只，健康对照组和荷瘤对照组每鼠每天腹腔注射生理盐水0.2mL，共14天；5-Fu组按20mg/kg·d剂量每鼠每天腹腔注射0.2mL，共14天；瑞香素组按4mg/kg·d剂量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL，共14天；DC疫苗组于接种肿瘤细胞后的第1d、7d在接种部位瘤周皮6下注射DC疫苗（5×10/只）；瑞香素联合DC疫苗组：瑞香素按4mg/kg·d剂量每鼠每天腹腔注射瑞香素0.2mL，同时于接种肿瘤细胞后的第1d、7d在接6种部位瘤周皮下注射DC疫苗（5×10/只）。第15天处死治疗小鼠，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数

6、；4、检测小鼠NK细胞活性以及ConA诱导的脾T淋巴细胞增殖指数（MTT法）；5、HE染色，光镜下观察H22肝癌组织病理学改变；6、ELISA法检测各组小鼠血清中细胞因子IFN-γ、ΙL-12、ΙL-4的水平；7、RT-qPCR法检测各组小鼠肿瘤组织Bcl-2、BaxmRNA的表达。结果:1、①瑞香素浓度（µg/mL）为250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、I摘要1.95、0.97、0.48时，作用HepG2细胞48h，其抑制率（%）分别为：63.71±2.20、62.69±0.76、61.68±1.80、59.

7、09±1.08、56.40±1.33、47.92±1.65和28.02±2.23、20.05±1.60、16.60±1.53、10.10±1.71，IC50值（µg/mL）为21.89±0.70。②瑞香素浓度（µg/mL）为250、125、62.5、31.25、15.62、7.81、3.90、1.95、0.97、0.48时，作用于H22细胞48h，其抑制率（%）分别为：85.52±5.15、65.04±4.72、61.04±5.94、50.77±7.40、47.26±8.49、45.21±6.37、36.52±3.53、33.55±8.26、2

8、3.62±8.67、19.79±5.47，IC50值（µg/mL）为16.89±9.64。2、各用药组对小鼠移植瘤生长均有抑制作用，以5-Fu组最为明