冬凌草甲素抑制h22小鼠移植性实体瘤增殖的作用

《冬凌草甲素抑制h22小鼠移植性实体瘤增殖的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、冬凌草甲素抑制H22小鼠移植性实体瘤增殖的作用：王培军韩淑云陈乃峰孙权张东东韩曦扈清云【摘要】目的探讨不同浓度的冬凌草甲素对小鼠H22肿瘤细胞生长影响及其抑瘤作用机制。方法将H22肿瘤细胞接种到小鼠皮下，建立肝癌H22移植瘤模型。用高、中、低三个剂量的冬凌草甲素灌胃2orechanisminmice.MethodsH22transplantedtumormodeladebyinjectionofH22tumorcellsunderskinoftherightaxillaryandhigh,middleandloinistrationfor2orinhibitionratee

2、asuredandthebcl-2,p53andcaspase3expressionmunohistochemistry.ResultsH22transplantedtumorcellsorproliferation(P<0.01).InhibitionrateofhighdosageeasMitomycin(P>0.05).Thepositiveexpressionrateofgenebcl-2,p53andcaspase3iceent.ConclusionsOridonincaninhibitthetumorgroanner,orcells.　　【Keyg/

3、支(C≥98%);丝裂霉素(浙江海正药业股份有限公司,批号：H33020786)。实验瘤源小鼠：H22腹水瘤小鼠(哈尔滨肿瘤研究所提供);昆明种近交系小鼠，雌雄各半，体重(18±2)g，佳木斯大学实验动物中心提供，许可证号：黑动字第99101001，普通级。TUNEL试剂盒、bcl-2、p53和caspase3试剂盒及DAB显色试剂盒(武汉博士德生物公司)。　　1.2实体瘤抑制实验将接种H22瘤种8d的腹水瘤小鼠以脱颈法处死，无菌条件下抽取腹水瘤细胞悬液5ml，经离心稀释，用生理盐水重新悬浮细胞，细胞悬液浓度为1×106/ml。以每只0.2ml接种于100只昆明种小鼠(雌雄

4、各半，雌雄分笼饲养)右腋下，制成实体瘤动物模型。接种24h后，分别随机分成5组，每组20只。低、中、高剂量组、阳性对照组和阴性对照组。分别灌胃不同剂量的冬凌草甲素，低、中、高剂量组按照50、100、200mg·kg-1·d-1剂量灌胃，阳性对照组按照10mg·kg-1·d-1(药量/小鼠体重)的剂量灌胃丝裂霉素，阴性对照组小鼠灌胃给予生理盐水0.2ml。连续14d。　　1.3样本采集第15天处死小鼠，取肿瘤组织称重并制片。　　1.4TUNEL法检测细胞凋亡细胞凋亡检测步骤按原位细胞凋亡检测试剂盒说明书进行。细胞核呈棕黄色为TUNEL反应阳性细胞(即凋亡细胞)。光镜下随机计数

5、10个高倍视野(×400)阳性细胞所占百分数即为细胞凋亡率。　　1.5bcl-2、p53、caspase3的免疫组化检测石蜡切片常规脱蜡至水，用3%H2O2灭活内源性酶5~10min。微波炉枸橼酸盐缓冲液抗原修复后，免疫组织化学染色方法参照SABC试剂盒说明书进行，其中一抗bcl-2、p53和caspase3用0.1mol/LPBS(pH7.4)1∶50浓度稀释，以PBS替代一抗作阴性对照。DAB显色后，苏木精轻度复染，脱水，透明，封片，显微镜下观察。细胞膜和细胞质出现棕黄色或褐色为bcl-2、caspase3表达阳性细胞，胞浆和胞核内出现棕黄色或褐色为p53阳性表达细胞。

6、显微镜下选取每个区域不重复的随机10个高倍视野(×400)，计算bcl-2、p53和caspase3阳性细胞数，求平均值。　　1.6统计学处理结果用x±s表示，组间均数的比较用方差分析，两两比较用q检验。　　2.3冬凌草甲素对p53、bcl-2和caspase3表达影响免疫组织化学检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白表达变化明显，p53、bcl-2和caspase3阳性率与对照组比较差别有统计学意义，呈剂量依赖型(P<0.01)，见表1。表1冬凌草甲素对H22小鼠肿瘤抑制率及bcl-2、p53、caspase3表达影响　　3讨论　　冬凌草甲素是从冬凌草中提取出来具有广泛抗癌活性的

7、天然有机物。给小鼠静脉推注〔3H〕冬凌草甲素后，以胆囊、肠道、食管叶放放射性含量较高，而在4h时胆囊放射性又是食管、肠道的20余倍〔2〕。因此，冬凌草甲素有希望在消化道肿瘤中起良好的作用。本实验表明冬凌草甲素对肝癌H22小鼠移植瘤具有抑制作用，高剂量效果最佳。caspases被认为是细胞凋亡的核心执行者即凋亡的共同通路〔3〕。bcl-2家族在细胞凋亡时的作用极其重要，抑凋亡蛋白的过度表达，可增强线粒体膜电位，阻止细胞色素C的释放，从而阻碍正常的细胞凋亡路径，对肿瘤的发展起到推动作用〔4〕。caspase3是casp