二甲双胍对裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖抑制作用

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1、二甲双胍对裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖抑制作用Metformininducesgrowthinhibitionofhepatocellularcarcinomaxenograftsinnudemice院（系、所）：汕头大学医学院专业：内科学研究生：李优锋指导老师：程继东教授汕头大学医学院2012年5月学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日

2、期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文摘要背景及目的二甲双胍为双胍类口服降糖药,是一种广泛使用的主要针对2型糖尿病治疗的一线药物。近年来研究显示，二甲双胍不仅有降血糖作用，还有抗肿瘤的生物效应，并能降低肿

3、瘤的发病率和病死率。研究已经证明二甲双胍能抑制结肠癌、乳腺癌、前列腺癌细胞的增殖，其重要机制之一是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activatedproteinkinase，AMPK），并诱导细胞周期停滞。然而有关二甲双胍对肝细胞癌细胞增殖抑制、细胞周期停滞及其机制的报道不多，对裸小鼠肝细胞癌移植瘤是否具有增殖抑制作用及其机制也未见报道。我们前期的体外研究已经发现二甲双胍可以诱导肝细胞癌细胞株细胞周期停滞和增殖抑制，本实验是在体外研究结果的基础上，进一步对二甲双胍对裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖抑制作用及分子机制进行研究，为二甲双胍成为抗肿瘤药物以及临床上预防和治疗肝细胞癌提

4、供新的理论基础。材料和方法1.用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI-1640培养基培养人肝癌细胞株PLC/PRF/5细胞。2.将8周龄雌性裸小鼠随机分为2组（实验组、对照组），实验组用二甲双胍工作液灌胃（160mg/Kg·d）、对照组用等体积的生理盐水灌胃，1周后将人肝癌细胞株PLC/PRF/56细胞（1×10个/点）接种在裸小鼠皮下，建立裸小鼠肝细胞癌移植瘤动物模型。继续灌胃7周后处死，计算成瘤率并取肝细胞癌移植瘤组织称重、WesternBlot分析及病理解析。3.WesternBlot检测经二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织AMPK磷酸

5、化程度。4.免疫组织化学染色观察经二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织Ki-67、cyclinD1、kip1P27的表达，并应用LeicaIM50图像采集系统和ImageJ软件对免疫组织化学染色I汕头大学医学院硕士学位论文的结果进行定量分析。5.观察灌胃前后裸小鼠的体重、血糖变化。6.实验数据分析和处理：用SPSS17.0软件，对成瘤率使用卡方检验，其余数据使用两个独立样本的t检验进行统计学分析。结果1.二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤成瘤率显著性降低。2.二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤平均重量显著性降低。3.二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织中增殖活性因子Ki-67表达程度显著性降低

6、。4.二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织AMPK磷酸化程度显著性增强。kip15.二甲双胍干预的肝细胞癌移植瘤组织cyclinD1表达显著性降低，P27表达显著性增强。6.二甲双胍对裸小鼠体重及正常血糖水平无显著性影响。结论二甲双胍通过磷酸化激活AMPK，下调细胞周期调节蛋白cyclinD1，上调细胞周期kip1蛋白依赖性激酶抑制因子P27的表达，抑制细胞周期，进而抑制裸小鼠肝细胞癌移植瘤的增殖活性。关键词：二甲双胍；肝细胞癌移植瘤动物模型；AMPK；细胞增殖；细胞周期调节蛋白II汕头大学医学院硕士学位论文AbstractBackgroundandObjectivesTheb

7、iguanideantihyperglycemicdrug,metforministhemostwidelyusedforthetreatmentoftype2diabetesmellitus.Inrecentyears,theresearcheshaveshownthatmetforminnotonlyreducesthebloodglucoselevels,butalsoplaysanimportantroleinanticarcinogenesis.Studiesdemonstratedmetforminin