百日咳毒素对裸鼠子宫内膜癌移植瘤的抑制作用

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUnversityforthedegreeofMasterInhibitioneffectofpertussistoxinonsubcutaneoushumanendometrialcarcinomaxenograftsinnudemiceByDongmeiHuSupervisor：Prof．YuhuanQiao(_iynaecolo擘；yandobstrics，一-ThefirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversityApril2013原创性声明本人

2、郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。除中文中已经注明引用的内容外，本人不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式表明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：由够擒日期：功门年甲月3日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入

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4、”发挥作用，还有“非基因转录效应’’。研究表明，雌激素可激活子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B(P13K／AKT)信号通路，发挥“非核效应"促进癌细胞生长，而GPER是介导“非基因转录效应”最可能的候选分子。我们前期研究提示，子宫内膜癌中雌激素对P13K／AKT信号通路活化极有可能是由G蛋白偶联雌激素受体(GPER)介导。百日咳毒素(Pertussistoxin，PTX)是百日咳杆菌产生的一种毒力蛋白，抑制G蛋白介导的相关通路。国内外关于PTX阻断GPER及其介导的AKT信号通路的研究，报道极少，本实验通过建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型

5、，观察G蛋白偶联受体抑制剂百日咳毒素(PTX)对子宫内膜癌移植瘤的细胞凋亡及对磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B(P13K／AKT)信号传导通路中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响，探讨通过阻断GPER及其介导的P13K／AKT信号通路来治疗子宫内膜癌的可能性。方法1．静置贴壁法体外培养人子宫内膜癌HEC．1A、Ishikawa细胞系。l摘要2．建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型以及实验分组和给药，无特定病原体(specific．pathogenfree，SPF)级环境下饲养裸鼠，裸鼠购回后适应性生长3天，取对数生长期的HEC．1A、Ishikaw

6、a细胞，收集后制成1．2x107／mL的细胞悬液，无菌条件下接种于裸鼠右背部皮下，O．2ml／只(约含2．4×106个细胞)，接种瘤细胞后将裸鼠在原条件下饲养，每天观察其精神、活动、饮食、排便等状况。细胞接种7天后，可见裸鼠背部结节状肿瘤生长，以最长径达5mm为成瘤阳性标准，将HEC．1A、Ishikawa细胞接种后成瘤阳性的裸鼠分为4组：HEC．1A对照组、HEC一1A实验组、Ishikawa对照组、Ishikawa实验组，每组7只，实验组腹腔注射PTX(250ng／只)，每周2次，共4周，对照组腹腔注射同体积生理盐水建立裸鼠子宫内膜癌移植

7、瘤模型、测量裸鼠体重及瘤体大小。3．HE染色光学显微镜下观察移植瘤组织的病理学特点，原位末端标记法(TUNEL)检测移植瘤组织中凋亡细胞，计算凋亡指数(舢)，比较实验组与对照组的凋亡情况。4．免疫组织化学SP法观察阳性细胞数和染色强度并记分进行半定量分析检测P．AKT的表达情况。5．统计学方法，采用SPSS17．0软件分析，方差齐性检验、t检验、等级资料秩和检验等，a--0．05为检验水准，P<0．05为差异有统计学意义。结果1．PTX均能有效抑制HEC．1A、Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长，抑瘤率分别为38．74％、33．21％。2．H

8、E染色显示，与对照组相比实验组细胞异型性、核浆比相对较小；TUNEL检测可见实验组细胞凋亡比率较对照组明显提高(Ishikawa，，=一10．69，P<0．05；H