环介导等温扩增技术对外源转基因成分检测及其协同验证

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1、－．－一？、‘．？—ＬＩ…口ｗ、？，一一ｒ一，．？、ｉ■■＊＇—；＇，．ｔ．？．ｖＴ———；、、ＴｖＪｇ，，＇．．．’■，．’：．．，＇■＇分类号学号Ｍ１２０８１０ｖ；ＪＵＤＣ密级．．．ｆ．、秦叫义聲ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ■ｊ硕击学隹冷文（学木型）巧介导等温扩增技术对外源转基因成分检测及其协同验证李荣？．（指导教师姓名：纪丽莲教授，扬州大学，江茨扬州．２２５００９赵祥祥教授，淮阴师范学院，江苏淮安，２２３００１申请学位级别：硕

2、去学科专业名称；营养与食品卫生学论文提交日期；２０１５年６月论文答辩日期；２０１５年５月２６日学位授予单位：扬州大学学位授予日期；２０１５年６月３０日答辩委员会主席：崔成凯教授２０１５年０６月李荣环介导等温扩增方法检测外源转基因成分及其协同验证摘要近些年来转基因食品的安全性问题受到了社会各界的广泛关注，因此国家对转基因食。品安全的监管为度也在逐步加强目前对转基因食品的检测，除了常规的单鞭标核酸检测夕ｈ，还包括对多祀标目的基因进行筛选检测和分析。随着技术的不断发展和进步，转基因食品的检测技术也正向着快速、精确、窝通量的检测方向发展。常规的

3、转基因食品检测方法主要是聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ＾ＰＣＲ）技术、实时巧光定量技术，但这些转基因检测技术都需要精密复杂的温度循环仪器而且检测时间比较长，这样就极大限制了它们在现场或者田间快速检测的推广和应用。但近些年等－ｍｅｄｓｏｅｒ湿核酸扩增技术得到了快速的发展，其中环介导等湿扩增技术（ＬｏｏｐｉａｔｅｄＩｔｈｍａｌＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｌａｍｐ）凭着特异性和灵敏度高、简单高效、所需仪器简单等的优势在细菌、病毒、转基因食品等领域得到了广泛的应用。本研究选择了转基因粮油原料中常见的３种外源转基因成分，利用环介导等温扩增

4、方法对其外源转基因成分进行检测。根据运３种常见外源转基因成分ｅｐｗｓ，ｆａｆ，ＷＴ巧＞的基因序列，设计特异性的环介导等温扩增ＬＡＭＩ，优化反应体系，（）引物并通过在扩增产物中加入ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩｌＯＯＯｘ巧光染料，建立了可视化的环介导等温扩增检测方法。（）实验结果表明，本研究建立的环介导等温扩增方法对这３和外源转基因成分（ＣＴ４ｅｐｗｓ，尸ａ￣ｆｉＶｆ７Ｖ／测的特异性高，灵敏度强，检测限基本上都能达到５１０拷贝，比传统ＰＣ氏，）检的检测限高，检测结果可Ｗ通过琼脂糖凝胶电，而且整个ＬＡＭＰ检测过程仅需１小时左右’泳和染料两种方法来判断。为了验证建立

5、的环介导等温扩增方法的实用性和有效性，我们邀请了国内外１０家研究机构进行协同验证。对建立的ＬＡＭＰ检测方法验证之后，将该方法运用于样品的实际检测当中。因此，而且，环介导等温扩增技术的运用不仅实现了快速、商效的实验室内部检测也为现场或田间检测提供了强有为的技术支持。：环介导等温扩增关键词；转基因检测；外源转基因成分；协同验证２扬州大学硕击学位论义ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｓａ色ｔｙｏｆｅｎｅｔｉｃａｌｌｍｏｄ巧ｅｄ仿ｏｄＧＭｆｏｏｄｉｎｒｅｃｅｎｔｅａｒｓｈａｓｂｅｅｎｔｈｅｈｏｔｔｏｉｃｉｎｙ（）ｐｇｙ化ｅｐｕｂｌｉｃ．Ｔｈ

6、ｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｍｏｃＨｆｉｅｄｆｂｏｄｓａｆｅｔｙｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｈａｓｂｅｃｏｍｅｓｎＫ）ｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔ．Ｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｅｘｏｇｅｎｏｕｓｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｍｏｄｉｆｉｅｄ（ＧＭ）ｆｏｏｄ，ｔｈｅｄｅ化ｃｔｉｏｎ化；ｎｄ化ｎｏｔ０打ｌｙ拓ｒｔｈｅｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｓｉｎｇｌｅｔａｒｇｅｔｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｂｕｔ－ａｔｔｔｔｔｔｔ．ｌｓｏｆｏｒｒａｉｄａｃｃｕｒａｅ

7、ａ打ｄｈｉｈｈｒｏｕｌｕｔｍｕｌｔｌｅａｒｅｓｄｅｌｅｔｉｏｎａｎａｓｉｓａｈｅｓａｍｅｉｍｅｐ，ｇｇｐｐｇｔｙＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌＧＭｆｏｏｄｄ別ｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｓｍａｉｎｌｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏ打（ＰＣＲ）化－ｔｏｎａｎｃｈｎｏｂｒｅａｌｉｍｅｆｌｕｒｅｓｃｅｔｕｔｉｔａｔｉｖｅＰＣ民把ｃｈｎｏｌｏｂｕｔｔｈｅｓｅｔｒａｎ