猪带绦虫缺氧诱导因子-1(hif-1)的原核和真核表达

《猪带绦虫缺氧诱导因子-1(hif-1)的原核和真核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文猪带绦虫缺氧诱导因子-1（HIF-1）的原核和真核表达Theprokaryoticandeukaryoticexpressionofthehypoxiainduciblefactor-1(HIF-1)fromTaeniasolium周玲玲指导教师姓名才学鹏研究员（兰州兽医研究所兰州730046）曾巧英教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称预防兽医学研究方向病原分子生物学与免疫学论文答辩日期2015年5月30日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席付宝权研究员评阅人刘光远研究员孙晓林教授2015年6月

2、甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要猪带绦虫幼虫即猪囊尾蚴，通常寄生在人和猪的皮下组织、肌肉和脑等组织器官，成虫主要寄生在人体小肠。猪带绦虫寄生的部位主要为厌氧环境，低氧对虫体的生长、发育和存活影响巨大。缺氧诱导因子-1的主要作用是帮助组织细胞在低氧环境下快速生长、促进糖降解等。本文根据猪带绦虫全基因组数据，克隆表达了猪带绦虫缺氧诱导因子-1（HIF-1），并进行了相关研究，结果如下：1、提取猪带绦虫RNA，反转录成cDNA，以此为模板，首次成功克隆出猪带绦虫HIF-1基因。该基因大小为303bp，编码100个氨基酸，分子质量为11.27ku。2、成功构建了原核表达

3、载体pET-30a(+)-HIF-1，并进行了表达。重组蛋白主要以包涵体形式存在，大小约为17ku。Westernblotting结果表明，纯化的重组蛋白pET-30a(+)-HIF-1可以与标签抗体发生特异性反应。3、用纯化后的重组蛋白HIF-1免疫新西兰大白兔。三免后分离血清，获得较高滴度的特异性抗体，抗体滴度为1:51200。4、将HIF-1基因成功克隆至真核表达载体，构建了pcDNA3.1-HIF-1，并转染293T细胞，经Westernblotting检测，该基因在真核表达系统也成功表达。综上所述，缺氧诱导因子-1（HIF-1）在原核系统和真核系统都能成功的

4、表达，重组蛋白都能被多克隆抗体所识别，制备出的多抗也具有较高的抗体滴度。这为更深入的研究HIF-1在虫体上的功能及作用机制奠定基础。关键词：猪带绦虫；缺氧诱导因子-1；原核表达；真核表达；多克隆抗体I甘肃农业大学2015届硕士学位论文SummaryTaeniasoliumlarvae,namedCysticercuscellulosae,caninfecthumanandpig,usuallyinthetissuesororgansofsubcutaneoustissue,muscles,andbrain.T.soliumadult,asthecauseagentof

5、Taeniasis,parasitizesinthesmallintestinalofhumanbody.T.soliumadultisparasiticinhypoxiaenvironmentandlowoxygenconditionplaysavitalroleinthesurvivaloftheT.solium.ThemainrolesofHypoxiainducingfactor-1(HIF-1)istohelptheorganizationcellgrowrapidlyinlowoxygenenvironmentandpromoteglycolysis,et

6、c.Therefore,inthisstudy,T.soliumHIF-1wasclonedandexpressedbasedonT.soliumgenomedatabase.Theresultsareasfollows:1.TotalRNAwasextractedfromT.soliumadulttissueandreverselytranscribedintocDNA.ThenT.soliumHIF-1wassuccessfullyclonedbasedonthecNDAtemplate.TheobtainedORFwas303bpinlength,encodin

7、g100aminoacids,andthetheoreticalmolecularweightofthisHIF-1proteinwasabout11.27ku.2.TherecombinantprokaryoticexpressionplasmidpET-30a(+)-HIF-1wasconstructedandinductivelyexpressed.Therecombinantproteinwasmainlyexpressedintheformofinclusionbodiesinprokaryoticexpressionsystem.West