海水养殖源弧菌耐药性调查与致病性弧菌毒力基因检测

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1、学校代码：10264研究生学号：M120104124上海海洋大学硕士学位论文海水养殖源弧菌耐药性调查与致病性题目：弧菌毒力基因检测Investigationofantimicrobialresistanceofmariculturesource英文题目：vibrioanddetectionofvirulencegenesofpathogenicvibrio专业：临床兽医学研究方向：水生动物源细菌耐药性姓名：胡梦华指导教师：房文红二O一五年四月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师

2、的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文

3、。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注研究员主席教授委员研究员委员研究员委员研究员委员研究员委员秘书答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文海水养殖源弧菌耐药性调查与致病性弧菌毒力基因检测摘要由于近些年，盲目的追求高产、超高密度的养殖、技术混乱、药物滥用、病害流行、种苗质量差、环境污染等原因，对对虾的养殖带来很大的影响。为了探究弧菌在对虾养殖过程中的流行病学、耐药性以及致病性，本研究针对本实验室保存的上海、江苏

4、、浙江、福建、海南等地海水养殖中发病对虾、鱼、蟹等的病料分理出的弧菌对这些弧菌进行耐药性的检测，利用PCR的方法检测各个菌株携带整合子的情况，对这些菌株进行耐药基因的检测，以及运用最小抑菌浓度法MIC来研究各个地区的弧菌耐药情况，针对耐药基因型和耐药表型对该菌做出正确的判断，对耐药株地区的人工养殖进行临床指导，合理利用抗生素来预防细菌性疾病，为临床指导提供了理论依据。在沿海5个省份采集到的患病动物和养殖水体等，这些样品主要采自凡纳滨对虾和青蟹的血淋巴、肝胰腺、肌肉组织等；和分离自鲈鱼、舌鳎、大菱鲆、河豚等的体表溃疡、肠道、腹水和血液样品。1、耐

5、药性分析本文主要进行了194株弧菌对8种抗生素的MIC值和耐药基因的检测，研究了分离菌株的耐药情况，对耐药表型和耐药基因型的相关性进行了比较，简单的总结了弧菌在各地区的耐药情况。194株菌的MIC值可以看出耐药率最高的为红霉素和复方新诺明，分别为60.8%和58.2%；而对于链霉素，则处于中介范围的菌株较多，有156株；耐药率最低的药物为氟苯尼考，仅有7.7%。从不同动物分离到的弧菌对8种抗菌药物的耐药率有所不同，从鱼类分离到的弧菌耐药率相对较高，蟹类的最低且对氟苯尼考和土霉素耐药率均为0。还对194株弧菌检测了1、2、3类整合子和4类整合子所

6、包含的整合酶基因。二类和三类整合酶均未检测到，一类整合酶检出率高达95.4%。194株菌中，其中11株菌均含有一类整合子的保守区，检出率为5.67%，但V-69、V-76、V-105这三株菌不但具有完整的整合子，而且还具有可变区基因盒。对可变区阳性PCR进行T-A克隆测序后分别得到了1308bp、1308bp和1315bp，这三株弧菌含有相同的基因盒，为利福平ADP-核糖基转移酶（RifampinADP-ribosylatingtransferase，arr-3）和二氢叶酸还原酶（Dihydrofolatereductase，dfrA27）两种

7、耐药基因盒，分别介导利福平和甲氧苄啶耐药。I上海海洋大学硕士学位论文2、对虾源副溶血弧菌毒力基因检测本章对试验室保存的74株对虾源副溶血弧菌进行毒力基因的检测和最近报道的副溶血弧菌pirA和pirB基因检测，和弧菌的Ⅲ型分泌系统T3SS1和T3SS2检测；并对几株副溶血弧菌进行对虾感染试验，根据24h的半致死浓度LC50，判断副溶血弧菌的致病性。检测结果tdh和trh对基因均未检测到，而tlh的检出61株，检出率为82.4%，T3SS1的检出率较高，最高的毒力基因VP1670的检出率最高为62.2%；而T3SS2的检出率较低，最低的毒力基因VP

8、A1362检出率为0%。在副溶血弧菌中检测pirA和pirB毒力因子，检出率分别为23.0%和20.3%。3、V-76溶藻弧菌多重耐药和致病性本研究从