海水弧菌耐药性调查及整合子-基因盒系统检测

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1、学校代码：10264研究生学号：M090104229上海海洋大学硕士学位论文题目：海水弧菌耐药性调查及整合子-基因盒系统检测英文题目：SurveyofantimicrobialresistanceanddetectionofintegrongenecassettesofVibrioisolatesfrommariculture专业：临床兽医学研究方向：水产动物药理学姓名：写腊月指导教师：房文红（研究员）二O一二年四月六日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学

2、位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文海水弧菌耐药性调查及整合子-基因盒系统检测摘要近年来，随着水产养殖业的迅猛发展，规模化、集约化养殖导致养殖环境日益恶化，为了防治细菌性病害，大量的抗菌素被应用于水产养殖过程的各个阶段，巨大的选择压力导致了养殖水域耐药细菌的种类和数量显著增加，养殖生物耐药病原菌病害的发生也越来越频繁。水产源细菌耐药性的流行不仅

4、加大了水生动物疫病的防控难度，给养殖业造成巨大损失，而且还可通过食物链感染人体或将耐药基因转移至人体病原菌，给食品安全和人体健康带来潜在危害。因此，目前迫切需要进行水产源细菌耐药性监测研究，以促进我国水产源细菌耐药性风险评估与防控的开展，保障水产养殖业发展和食品安全，维护人体健康。目前，水生细菌的耐药性检测，大部分只是停留在耐药表型上，主要是采用药敏纸片、MIC测定等方法。然而，随着分子生物学技术的发展，PCR等在耐药基因的检测，以及新的耐药机制发现方面发挥着非常重要作用。本研究首先从上海崇明、江苏启东

5、、海南琼海三地区海水养殖动物和水体收集弧菌样本，按弧菌科细菌的鉴定方法对所采集弧菌鉴定到种。按照美国临床试验室标准化委员会(Nationalcommitteeforclinicallaboratory，NCCLS)推荐的方法和结果判读标准，应用纸片扩散法（K-B）法测定了三地区的分离株对常用15种抗菌药物的耐药情况，从而对不同地区养殖水体弧菌分离株的耐药情况进行评价分析。然后，根据药敏试验结果，对于多重耐药菌株，采用PCR技术对其携带Ⅰ类整合子情况进行检测，同时对整合子阳性菌株携带基因盒进行分析。本实验

6、分两部分进行。1.不同地区养殖动物和水体弧菌分离株耐药性调查2009年~2011年间，从上海崇明、江苏启东、海南琼海三地养殖动物和水体共分离到弧菌224株，其中上海69株、江苏84株、海南71株。采用纸片扩散法（K-B）对15种常用抗菌药物进行药敏试验。结果显示：224株弧菌对15种抗菌药物均表现出不同程度的耐药性，不同地区分离弧菌对抗生素的耐药情况大体一致，但是对个别抗生素存在地区差异。不同地区的分离株均对氨基糖苷类，磺胺类的耐药率较高。三地区对妥布霉素、复方新诺明、新生霉素、利福平的耐药率均较高（≥

7、60%），对新霉素的耐药率维持在较低的水平，较为敏I上海海洋大学硕士学位论文感。三地区对壮观霉素的耐药率都维持在40%左右。上海、江苏、海南三地区分离的菌株对氨基糖苷类的卡那霉素、新霉素、壮观霉素都表现出中介值较高的情况，这有可能预示着耐药趋势的继续升高。多重耐药结果分析显示，上海地区分离菌株多重耐药率为100%，江苏地区分离菌株多重耐药率为76.2%，海南地区分离菌株多重耐药率为77.5%，由此可见，海水弧菌的多重耐药现象严重。比较三地区的多重耐药结果，多重耐药菌株集中在耐3种药物到7种药物之间。上海

8、地区，耐7种药物菌株数最多，其次为耐4、6种药物；江苏地区，耐4种药物菌株数最多，其次为耐5种药物；海南地区，耐5种药物菌株数最多，其次为耐3种药物。2.海水弧菌分离株整合子-基因盒检测采用PCR方法扩增188株多重耐药菌株基因组DNA、质粒DNA上的Ⅰ类整，合子的整合酶基因IntⅠ1、可变区、3-保守端。PCR检测结果显示，有84株基因组DNA上、56株质粒DNA上检测到IntⅠ1，检出率分别为44.7%，29.8%，对IntⅠ1阳性菌株