流行性乙型脑炎pcr检测方法的建立与应用

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523112096南昌大学专业学位研究生学位论文流行性乙型脑炎PCR检测方法的建立与应用StudyonMid-EastInteractiveDevelopmentandEconomicCooperationinMid-China’sRising杨江会培养单位（院、系）：南昌大学公共卫生学院指导教师姓名、职称：万腊根申请学位的学科门类：临床医学学科专业名称：临床检验诊断学论文答辩日期：2015年6月5日答辩委员会主席：评阅人：2015年6月学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除

2、了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股

3、份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：根据Genebank收录的流行性乙型脑炎病毒序列使用Oligo6.0软件及NCBIBlast设计特异性引物序列；不断优化PCR检测条件，采用不同反应温度，不同

4、反应时间，不同引物浓度确定最佳PCR检测条件，建立流行性乙型脑炎病毒RT-PCR检测方法。方法：以2013年6月至2013年10月间来本院就诊的21例流行性乙型脑炎患者为研究对象，并且以此期间在本院进行体检的健康人20例为健康对照组，收集所有患者和健康对照组研究对象的血液样本。采用PCR进行检测，并与ELISA方法进行比较。首先从研究对象的血液中分离流行性乙型脑炎病毒，接种BHK-21乳仓鼠肾细胞进行扩大培养，收集增殖培养后的病毒，根据Genebank收录的流行性乙型脑炎病毒序列使用Oligo6.0软件及NCBIBlast设计特异性引物序列，同时不断优化PCR检测条件，采用

5、不同反应温度，不同反应时间，不同引物浓度确定最佳PCR检测条件。对2013年6月至2014年12月间来本院就诊的87例疑似流行性乙型脑炎患者用RT--PCR方法进行检测，检测时直接使用疑似流行性乙型脑炎患者的血清进行检测。并与流行性乙型脑炎脑脊液ELISA检测方法进行比较。检测其准确度和灵敏度。结果：PCR条件为50℃、60min，引物加入1μl时PCR反应效果最佳。结果显示，PCR检测结果阳性率为95.2%，PCR产物测序表明PCR检测准确率达到100%。临床应用测评显示PCR检测的准确率可以达到96.8%。结论：RT-PCR具有很高的诊断准确率，能够缩短诊断时间，降低诊

6、断费用，减少患者受到的伤害，可以在临床诊断乙型脑炎方面推广应用。关键词：乙型脑炎；PCR；阳性率；准确率IIAbstractABSTRACTObjective：AccordingtotheJapaneseencephalitisvirussequencedbyGenebankandNCBIspecificBlastprimersandOligo6.0software.ByconstantlyoptimizedthePCRassayconditions,usingdifferentreactiontemperature,timeandprimerconcentrationst

7、odeterminetheoptimaltestingconditions,toestablishthemethodofdetectingJapaneseencephalitisvirusbyRT-PCR.Methods：Theresearchincluded21epidemicencephalitisBpatientsastheexperimentalgroup,20casesofhealthypeoplewerecollectedascontrolgroup.Thecaseswerecollecteddurin