日本血吸虫tor基因克隆表达及生物学功能研究

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文日本血吸虫TOR基因克隆表达及生物学功能研究Cloning,ExpressionandBiologicalFunctionStudyofSchistosomajaponicumTOR硕士研宄生：马帅指导教师：傅志强研宄员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物寄生虫及其分子生物学培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年6月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文日本血吸虫TOR基因克隆表达及生物学功能研究Cloning,ExpressionandBiologicalFunctionSt

2、udyofSchistosomajaponicumTOR硕士研究生：马帅指导教师：傅志强研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：动物寄生虫及其分子生物学培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年6月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationCloning,ExpressionandBiologicalFunctionStudyofSchistosomajaponicumTORM.S.Candidate:ShuaiMaSupervisor:Prof

3、.Zhi-qiangFuMajor:PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:AnimalParasitologyandMolecularBiologyJune2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果^尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授

4、权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。时间：年<月/曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目日本血吸虫TOR基因克隆表达及生物学功能研究动物寄生虫论文作者马帅专业预防兽医学研究方向及:H：分子牛物学指导教师傅志强培养单位（研究所、中心）上姓名职称单位专业张彦明教授西北农林科技大学预防兽医

5、学评阅郭慧深副研究员兰州兽医研究所预防兽医学人主程训佳教授复旦大学预防兽医学席朱建国教授上海交通大学预防兽医学冯新港研究员上海兽医研究所预防兽医学答刘金明研究员上海兽医研究所预防兽医学辩朱传刚副研究员上海兽医研究所预防兽医学委员会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点2015年5月27日，上海兽医研究所摘要血吸虫病仍然是一个全球性公共卫生问题，数以亿计的人受其威胁。环境治理和药物干预是当前防控的主要措施。研发高效、安全的疫苗是血吸虫病持续控制的研究方向之一。宿主补体是宿主免疫杀伤寄生虫的重要效应因子，血吸虫可以通过一些自身蛋白调节宿主补

6、体级联反应而逃避宿主的免疫攻击。血吸虫体被表膜中具抑制补体功能的蛋白有可能成为疫苗候选分子。四跨膜孤儿受体（TOR）是一种多跨膜受体蛋白，具有补体C2结合位点，可抑制C3转化酶的形成而调节补体级联反应。曼氏血吸虫TOR（SmTOR）的研究表明，该分子能诱导较高的保护效果。本文根据实验室前期日本血吸虫体被表膜蛋白质组研究结果，开展了日本血吸虫TOR（SjTOR）蛋白特性和生物学功能研究。根据SjTOR参考序列，设计引物应用PCR克隆得到SjTOR基因片段，长度为1245bps，编码414个氨基酸，比对分析显示与SmTOR、埃及血吸虫TO

7、R（ShTOR）、锥虫TOR相似性分别为77.0%、72.0%、和75.0%。序列分析显示，SjTOR不含信号肽，具有5个N糖基化位点；跨膜结构预测表明，SjTOR包含四个跨膜结构域。实时定量PCR结果显示，SjTOR在虫体发育的各个时期均有转录，在尾蚴时期转录水平最高，在雌虫中的转录明显高于雄虫。免疫组化实验结果表明SjTOR主要分布于虫体的表膜，在实质组织也有分布。根据SjTOR第一个膜外区（SjTOR-ed1，AA47-168）序列设计合成引物，构建含SjTOR第一个膜外区（SjTOR-ed1）基因的重组表达质粒pET-28a-

8、SjTOR-ed1，在BL21（DE3）大肠杆菌中诱导表达，并用组蛋白亲和层析纯化获得重组蛋白rSjTOR-ed1，分子量约为14kDa。Westernblot结果表明重组蛋白rSjTOR-ed1具有良好的免疫原性。用重