西北地区奶牛贾第虫和隐孢子虫流行病学调查及基因型研究

《西北地区奶牛贾第虫和隐孢子虫流行病学调查及基因型研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、．：Ｓ８５５９：１的６４分类号单位代码密级：学号：１２７２０２４０容化怎＆扛弓学位论文西北地区奶牛贾第虫和隐抱子虫流行病学调查及基因型研究ＥｉｄｅｍｉｏｌｏｉｃａｌａｎｄＧｅｎｏｔｉｃＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＧｉａｒｄｉａａｎｄｐｇｙｐ？Ｏｙ／；化成ｉｎＤａｉｒｙＣａｔｔｌｅｉｎＮｏｒｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａ研究生；谭启东指导教师：徐前明副教授合作指导教师；失兴令研究贵申请学位口类级别；农学硕ｄｒ专业名称；预防兽戾学

2、研究方向；兽侯寄牛．虫与寄生虫病学’所在学院；动物科巧学院Ｖ答辩委员会主席；＼二零…五年六月独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中持别加Ｗ标注和致谢的地方夕ｈ论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名；１／食杳ｆ／Ｔ年月签字日期：巧

3、ｉｇ日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阔和借阅。本人授权安徽农业大学可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。非学位论文作者签名；’指导獅签名；轉細啤签字曰期：年ｔ月＾曰签字曰期：＾／巧／

4、月曰学工位论文作者毕业后去向：通作单位：电话：信地扯：邮编；摘要贾第虫（Giardia）和隐孢子虫（Cryptosporidium）是重要的人兽共患寄生性原虫，主要传播途径包括直接接触或摄入污染的食物和饮水而感染，严重威胁着动物生长发育，给畜牧养殖业带来巨大经济损失，同时，也潜在地威胁着人类健康。针对贾第虫病和隐孢子虫病，尚未研发出有效的药物和疫苗。掌握奶牛贾第虫和隐孢子虫的感染情况、流行特点及种/基因型分布等可为防控奶牛贾第虫病和隐孢子虫病提供基本依据。本研究选择了甘肃省和宁夏回族自治区

5、3个地市的19个奶牛场，于2012年11月至2014年03月采集了不同年龄阶段的奶牛的粪便样品，对奶牛贾第虫和隐孢子虫感染情况进行调查研究，并对贾第虫和隐孢子虫分离株进行分子鉴定和基因分型研究。1.采用福尔马林-乙酸乙酯沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法等方法对采集到的2945份奶牛粪便样品进行显微镜检测，并采用分子生物学方法对镜检为阳性样品及疑似阳性样品进行检测。结果表明，107份样品呈贾第虫阳性的，隐孢子虫阳性样品为150份，贾第虫和隐孢子虫感染率分别为3.63%和5.09%；贾第虫在春季的感染率最高

6、，为5.79%，而隐孢子虫则在秋季感染率最高，为6.96%；在年龄方面，3月龄及以下的奶牛的贾第虫和隐孢子虫感染率最高，分别为10.45%和14.01%。2.为掌握奶牛贾第虫的遗传特征，通过对107个贾第虫分离株进行分子鉴定，采用巢式PCR方法特异性扩增TPI基因，测定序列，并在NCBI核酸序列数据库上进行Blast检索，应用ClustalX软件比对序列以及应用Mega软件构建分子进化树，以期阐明所分离的贾第虫种类和基因型关系。结果表明：PCR扩增产物片段大小为530bp，与预期结果相一致。进化树分析结果显示107

7、个分离株均为肠贾第虫（Giardiaintestinalis），但序列之间存在差异性，其中1个分离株属于聚集体A，106个分离株属于聚集体E。3.同样，对隐孢子虫分离株进行分子生物学方法鉴定，采用PCR方法扩增SSUrRNA基因，并对所得序列进行测序和比对分析。PCR扩增结果显示目的片段大小为830bp。序列分析发现在150份奶牛粪便样品中分离到36株为安氏隐孢子虫（Cryptosporidiumandersoni），24株为芮氏隐孢子虫（Cryptosporidiumryanae），70株为牛隐孢子虫（Crypt

8、osporidiumbovis）和20株为微小隐孢子虫（Cryptosporidiumparvum），其中以C.bovis感染率最高。4.此外，利用MLST技术对奶牛C.andersoni分离株进行亚型分析。20个分离株被成功分型，主要为2个MLST亚型，即A4，A4，A4，A1和A5，A4，A2，A1。甘肃省奶牛C.andersoni的遗传多样性较宁夏回族