实验五（原虫1）阿米巴、利什曼原虫 贾第虫、隐孢子虫.ppt

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1、实验五（原虫1）阿米巴、利什曼原虫贾第虫、隐孢子虫掌握:溶组织阿米巴滋养体和包囊的形态特征；利什曼原虫无鞭毛体；隐孢子虫卵囊；贾第虫滋养体的镜下形态特征；各种常见原虫实验诊断方法。熟悉:利什曼前鞭毛体形态；阿米巴和贾第虫的包囊碘液涂片染色的方法。实验目的和要求示教内容（显微镜下）：(a)利什曼前鞭毛体和无鞭毛体；(b)蓝氏贾第虫滋养体和包囊；(c)隐孢子虫卵囊；观察内容：溶组织阿米巴滋养体和包囊；贾第虫滋养体和包囊（铁苏木术染色）；利什曼无鞭毛体和前鞭毛体（吉氏染色）；隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）。操作内容：介绍淋巴结或者骨髓穿刺检查无鞭毛体碘

2、液涂片染色检查溶组织阿米巴的包囊；电教：溶组织内阿米巴作业：1、绘蓝第虫滋养体、溶组织阿米巴滋养体和包囊、黑热病原虫前鞭毛体。2、溶组织阿米巴检查中注意事项？实验内容溶组织内阿米巴（Eatamoebahistolytica）又称痢疾阿米巴，寄生于结肠和其他组织内，引起阿米巴病。其生活史中具有滋养体和包囊两种形态。1、滋养体：形态变化大，大小为10-60μm，具有侵袭性。活体时伸出伪足作活泼的变形运动-阿米巴动。滋养体内外质分明，外质薄而透明，内质呈颗粒状，可见被吞噬的红细胞和食物泡，具一个圆形的泡状核。胞核直径4-7μm，核膜薄，其内缘有单层排

3、列、大小一致的核周染色质粒，核仁细小，居中，核仁与核膜之间隐约可见网状的核纤丝。一、形态滋养体包囊滋养体（铁苏木素染色）包囊呈无色透明的圆球体，直径10-16μm，胞质内可呈棒状的糖原泡和拟染色体（营养储存结构）。囊壁厚，囊内有泡状细胞核，四核包囊为成熟包囊（感染期）。碘染：呈棕黄色球形小体，可见核及核仁，胞质内可见棕色的糖原泡及透明的拟染色体。铁苏木素染色：包囊呈黑蓝色，核结构清晰。2、包囊：溶组织阿米巴包囊×400.Enlarged×400.Enlarged×1000.Enlarged二、实验诊断病原学检查：稀便：急性期稀便或脓血便中查滋养

4、体，采用生理盐水涂片法（注意事项：保温、防止尿液污染、及时送检）成形粪便：碘液染色检查包囊脓肿穿刺液涂片查滋养体免疫诊断：杜氏利什曼原虫（Leishmania）利什曼原虫的生活史有前鞭毛体和无鞭毛体2个时期，前者寄生于昆虫（白蛉）消化道内；后者寄生于脊椎动物（如人、犬）单核吞噬细胞内。一、形态又称利杜体，椭圆形或圆形，常见于Mφ。染色后，核较大，圆形，呈紫红色或红色，胞质蓝色。内含有一个细小杆状的动基体，位于核旁。动基体之前有一个点状基体，由此发出一条根丝体。1、无鞭毛体寄生于白蛉消化道内，成熟虫体呈梭形.核位于中部，动基体在虫体前端，基体在动

5、基体之前.由基体发出1根鞭毛游离于体外，鞭毛摆动活泼.1、前鞭毛体培养基中的前鞭毛体常聚集呈簇，排列呈菊花状。1、病原诊断：常用方法（1）穿刺涂片检查：骨髓穿刺原虫检出率为80～90%，（2）培养法：将穿刺物接种于NNN培养基，置22～250C温箱内，1周后查见运动活泼的前鞭毛体则可确诊。（3）动物接种法，将穿刺物接种于敏感动物，1-2月后取其肝、脾作涂片，染色镜检。（4）皮肤组织检查法：二、实验诊断2、免疫诊断：用于个例辅助诊断或流行病学调查。（1）血清抗体检测：（2）循环抗原检测。3、DNA诊断：PCR和分子杂交。简称贾第虫，寄生于人体小肠

6、，引起以腹泻和消化不良为主要症状的贾第虫病，分布于世界各地，儿童和旅游者患病率较高，故有旅游者腹泻之称。蓝氏贾第鞭毛虫一、形态1、滋养体：形似纵切的半个梨形，前端钝圆，后端渐变尖细，大小为9～21μm×5～15µm，两侧对称，背面隆起，腹面扁平。腹面的前部向内凹陷而成吸盘，滋养体借此吸附于肠粘膜上。经铁苏木素染色后，可见吸盘背侧胞质内有2个圆形泡状核。两核之间2条纵贯虫体的轴柱，其前端有基体，为鞭毛发源处，其中部有1对半月形的中体。虫体有4对鞭毛，按伸出部位分别称为前鞭毛，后鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛。铁苏木素染色×1000.Enlarged铁苏木素

7、染色瑞氏染色2、包囊：包囊椭圆形，囊壁较厚，大小为8-14µm×7～10µm。碘液染色后呈虫体黄绿色或灰蓝色，囊壁与虫体之间有明显空隙，核多偏于一端，数目2-4个，囊内可见轴柱，鞭毛。铁苏木素染色后，虫体呈蓝黑色，囊壁透明，囊内结构清晰可辨。1、病原学诊断：（1）粪便检查，为本病首选检查方法对腹泻者，用NS直接涂片法查活动的滋养体；对成形粪便，用碘液染色法查包囊。包囊形成有间歇，故检查时应隔日1次并连续3次以上送检为宜。（2）十二指肠液或胆汁检查：（3）小肠活组织检查，利用纤维胃镜取小肠粘膜组织进行压片或切片染色检查滋养体。二、诊断2、免疫诊断

8、：3、DNA诊断：隐孢子虫隐孢子虫卵囊抗酸染色作业绘图：溶组织阿米巴滋养体和包囊、杜氏利什曼原虫前鞭毛体、蓝氏贾第鞭毛虫滋养体。思考题：溶组织阿米巴检