广西奶牛隐孢子虫的流行病学调查

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1、分类号UDC$852．7硕士学位论文广西奶牛隐孢子虫的流行病学调查魏晓瑞学科专业基础兽医堂指导教师王晓匦数援论文答辩日期2013—525——学位授予日期答辩委员会主席拯感受究员J

2、IlllJrllllIllIIIIIllllHIIIrllrlllllIY2407126广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对

3、本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。，咿保密。(请在以上相应方框内打“√")论文作者签名：指导教师签名：作者联系电话：日期：Ⅳt弓．‘．修日期：≯，乡，／·夕f，电子邮箱

4、：9VIJLi(9髫圊￡锣’仍／1广西奶牛隐孢子虫的流行病学调查摘要本研究旨在通过调查广西奶牛隐孢子虫的流行病学，以摸清广西奶牛隐孢子虫的感染种类和流行规律。本研究对分离得到的部分虫株进行形态学鉴定以及利用PCR．RFLP方法对隐孢子虫的18SrRNA基因分析，进而鉴定广西牛源隐孢子虫株的种类。本实验室在2011-2012年对广西地区的9个县市10个规模化黑白花奶牛养殖场和4个个体养殖户共采集新鲜奶牛粪便样品6477头份，经过饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法进行检测，调查显示奶牛隐孢子虫的总感染率为14．31％(927／6477)；并初步

5、鉴定为安氏隐孢子虫。调查分析表明奶牛感染率和日龄呈现反比例关系，奶牛年龄越小感染率越高；在相同的感染强度下，奶牛年龄与感染率呈反比关系，感染率随奶牛年龄增长逐渐呈现下降趋势：调查还发现感染率受季节性变化的影响因素较小。为了能全面准确地调查广西奶牛隐孢子虫感染的种类和流行病学情况，本研究在调查奶牛隐孢子虫感染基础上，重点调查2月龄内犊奶牛隐孢子虫感染率。经醛一酯法处预理粪样可大大提高卵囊检出率，然后采用饱和糖溶液漂浮、抗酸染色法和PCR方法等对7个黑白花奶牛场的617份2月龄犊牛粪样检测，结果得到57株阳性粪样，感染率为9．24％，其中有6个

6、场为阳性场，每个场感染率在0％～34．O％。经过形态学和分子生物学鉴定，证实均为安氏隐孢子虫。为了解广西奶水牛隐孢子虫的流行情况，本研究同时检测广西8个规模化奶水牛养殖场、共1009头份不同日龄的奶水牛粪便样品，结果发现有1头奶水牛感染隐孢子虫，感染率约为O．1％(1／1009)，最终鉴定也为安氏隐孢子虫。本研究应用巢式PCR方法扩增分离虫株的18SrRNA基因的部分目的片段，利用PCR．RFLP技术鉴定了广西地区分离的奶牛隐孢子虫株的种类和基因型，经分子生物学技术最终确定广西牛源分离株虫种为安氏隐孢子虫。关键词：广西地区奶牛隐孢子虫基因型

7、流行病学调查EpidemiologicalinvestigationofcryptosporidiosisindairycattleinGuangxiprovinceABSTRACTThepurposeofthisstudyistoinvestgatetheepidemiologicalcharacteristicsofdairycattleCryptosporidiosisinGuangxiProvince，tofindoutGuangxiCOWCryptosporidiuminfectionandepidemicregularity．T

8、heCryptosporidiumisolateswereidentifiedbymicroscopeandPCR-RFLPmethod，analysisofthe18SrRNAgenewasusedtodetermineCryptosporidiumgenotype．CryptosporidiumoocystswerecollectedbytheSheater’Ssugarflotationtechniqueandmodifiedacid—faststainmethodfrom6477fecalsampleswhichwerecollec

9、tedfromtenHolsteindairycattlefarmsandfourindividualHoisteindairycattlefarmsofsevencountyt