褪黑素保护高剂量egcg引起的小鼠肝毒性及其分子机制

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1、：Ｓ５７１；分类号．１单位代码１０３６４１２７１００３密级：学号：９—么化；ｆｔ４义ｆ博±学位论文禮黑素保妒局剂量ＥＧＣＧ引起的小鼠肝毒性及其分子机制Ｍｅ－ＴｈｅＰｒｏｔ：ｅｃｔｉｖｅＥｆｆｅｃｔｏｆｌａｔｏｎｉｎｏｎ曲ｈｄｏｓｅｇ－－ａｏｃａｅｃｈｍ－－ａ－Ｅｉｌｌｔ３ｌｌａ化ＥＧＣＧｔｒｉ雜ｅｒｅｄＨｉａｔｉｏ化ｘｉｃｉｔ（）ｐｇｇ（）ｑｙａｎｄＰｏｔｅｎｔｉａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｈｉＭｉｃｅ研究生：王东旭指导教

2、师：张劲松教授合作指导教师；申请学位口类级别；农学博±专业名称：塞蓋研究方向：茶与傭康所在学院Ｉ茶与食品科巧学院Ａ可４诗答辩委员会主席：２０１５年６月＇－—＿■？？．－？独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加标法和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的

3、同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。、；学位论文作者签名东过。Ｇ签字之日期：年日月聲学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文，有权保印件和电子的规定留并向国家有关部口或机构送交论文的复文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可将学位论１文，可：｜印的全部或部分内容编入有关数据库进行检索采用影印、缩学位论文（保密或扫描等复制手段保存、汇的学位论文在解密后适编授权）。书用本学位论文作者签：名指导教师签名《

4、＞＞／签；日期：日签日期）月日字年月字Ｘ咬年５学位论文作者毕业后去：向工作单位：电话；通地址；：信邮编摘要表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，一种绿茶中天然存在的植物化学物质，是绿茶中公认的主要生物活性物质。近年的研究表明，EGCG发挥生物活性功能与其促氧化作用和所使用的剂量高度相关，往往取得良好效果依赖于高剂量。但临床上发现口服高剂量绿茶多酚提取物出现副作用，例如肝中毒、恶心、腹痛和腹泻等，已被美国食品和药物管理局确认为肝毒性靶点。随着研究的深入，在细胞模型、动物模型和流行病学上均发现高剂量

5、EGCG具有毒性特征，尤其是肝毒性，并阐明其毒性特征归于其促氧化作用。但其毒理机制是否存在分子靶点未见报道，所以利用不同处理方式和不同剂量水平系统探究EGCG在机体内的作用机制和毒靶点有着重要的意义。抗氧化酶，主要包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)，可利用氧化还原作用将过氧化物转换为毒害较低或无害的物质。抗氧化酶在机体内稳定高表达，维持着氧化还原环境的平衡，是机体对抗氧化损伤的第一道防线。核因子E2相关因子2(Nrf2)可调节抗氧化结合原件(ARE)介导的基因表达信号途径，Nr

6、f2调节的下游抗氧化和二相脱毒酶蛋白构成对抗亲电物和活性氧防御的第二道防线。因此抗氧化酶和Nrf2信号途径在保护机体免受外源化合物氧化损伤时发挥至关重要的作用。本文实验目的是确定高剂量EGCG可产生肝毒性，其毒理机制涉及影响抗氧化酶生物合成和调节Nrf2信号途径。利用小鼠多次腹水注射55mg/kg和75mg/kgEGCG的亚急性毒性模型和小鼠单次腹水注射200mg/kg的急性毒性模型证实：毒性剂量水平的EGCG在多个小鼠模型下可以引起肝毒性和氧化逆境。在亚急性模型下，发现毒性剂量EGCG抑制肝抗氧化酶生物合成，同时上调肝中

7、Nrf2转录水平及增强Nrf2蛋白核移位，诱导Nrf2下游基因表达，启动自适应援救反应。在急性模型下，发现毒性剂量EGCG处理不仅显著抑制抗氧化酶生物合成，同时抑制肝中Nrf2转录水平和蛋白水平，抑制Nrf2下游基因表达，同时抑制一线抗氧化和二线Nrf2途径，加剧毒性结局。以上结论也在小鼠口服灌胃毒性模型上得以验证，即毒性剂量EGCG抑制抗氧化酶合成，同时诱导Nrf2途径，而致死剂量EGCG同时抑制抗氧化酶合成和Nrf2途径。此外，发现无毒药理剂量EGCG不影响抗氧化酶合成，并且仅诱导典型Nrf2下游基因中的部分基因表达，

8、而此诱导可通过结合抗氧化剂褪黑素消除。说明EGCG诱导Nrf2途径依赖氧化逆境程度。褪黑素为内源性抗氧化剂，我们利用小鼠多次腹水注射55mg/kgEGCG的亚急性毒性模型和小鼠单次腹水注射125mg/kg的急性毒性模型证实：结合褪黑素可减轻高剂量EGCG引起的肝毒性和炎症反应。在亚急性和急性模型下，发现