苏云金芽胞杆菌对灰飞虱高效杀虫新基因的挖掘与功能研究

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1、分类号—学号鴻请泉毒乂赛博ｉ学位论文苏云金芽胞荷菌对灰飞動高效杀虫新基因的挖掘与巧能研巧刘永磊．■＊■？？．■，－＇指导教师李飞教巧石１开究员林贡剑屋。专业名称才又业昆虫■＾審虫防治研究方向昆虫生理生仏与分子生物学答辩鬥期二〇－－？五年五月二十八日％ＭＩＮＩＮＧＡＮＤＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬ…ＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＥＦＦＩＣＩＥＮＴＮＥＷＩＮＳＥＣＴＩＣＩＤＡＬＧＥＮＥＳ乂ＧＡＩＮＳＴＬＡＯＤＥＬＰＨＡＸＳＴＲＩＡＴＥＬＬＵＳ

2、ＦＲＯＭＢＡＣＩＬＬＵＳＴＨＵＲＩＮＧＩＥＮＳＩＳＢｙＹｏｎｌｅｉＬｉｕｇＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔ；ｏＮａｎｉｎＡｒｉｃ山ｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ比ｅ民ｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓＦｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＤｏｃｔｏｒｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＰｒｏ化ｓｓｏｒＦｅｉＬｉＡｓｓｏｃｉａｔｅｒｅｓｅａｒｃｈｅｒＫｅｉａｎＬｉｎｊ

3、ＣｏｍｐｌｅｂｄｉｎＡｒｉｌ２０１５ｐＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｐｇｙＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｉｎ２１００９５Ｐ艮Ｃｈｉｎａｊｇ，原创性声明本人郑重声明。：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研巧工作所取得的成果除文中己经注明引用的内容外．本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体。。，均己在文中Ｗ明

4、确方式标明本人完全意识到本声明的法律结累由本人承担＾学位论文作者（需亲笔）签名：＞＾年《月日／５ｊ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留，同、使用学位论文的规定意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子肢，化许论文被査闽和借巧．本人授巧巧京农业大学可Ｗ将本学位论文的全郁或部分、．肉容编入有关巧頒库进巧检巧，可Ｗ采用巧印缩印或扫描等复制手居保存巧汇编本学位论文保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。＂，，（请在社方框内打Ｖ）学位论文作者（需亲笔）签名：去冰

5、＜為如俾月ｉ曰导师（需亲笔）签名：年占月２日目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＶ一第章文献综述１１苏云金芽胞杆菌１１１１．苏云金芽胞杆菌及Ｂｔ杀虫蛋白１２化４．杀虫蛋白对半翅目昆虫的活性１．３化杀虫蛋白对稻飞風的活性７１．４Ｂｔ杀虫蛋白对于半翅目昆虫活性较低的原因７２．化新基因的发掘方法８２１８．基于ＰＣ民扩増的挖掘方法２２９．直接对Ｂｔ蛋白的鉴定３高通量测序在Ｂ１０ｔ研究中的应用３．１基于ＤＮＡ的高通量测序１０３．２基于ＲＮＡ的

6、高通量测序Ｕ４本研巧的目的与意义１１二Ｂ第章灰飞武高效生测体系建立与ｔ菌株对灰飞動的活性筛选１３１材料方法１３１１１３．供试虫源１２１３．人工饲料１３Ｂ１５．供试ｔ菌株８１．４Ｂｔ晶体蛋白的提取１１．５对蛋白样品的处理１８Ｌ６常用仪器１９１７１９．生测方法１．８数据分析１９２结果与分析１９２．１生测体系的建立与验证１９２．２化菌株活性筛选与鉴定２０２２３小结与讨论０ＴＳＵＣ第Ｈ章ＩＰＰＢＩ１０１２菌株中活性蛋白的分离及鉴定２５ｉ

7、苏云金芽胞杆菌对灰飞風高效杀虫新基因的挖掘与功能研究１材料方法２５１．１基因组提取及测序２５１．２ＩＰＰＢＩ０ＴＳＵＣ１０１２菌株蛋白提取２６１３ＳＤＳ－．ＰＡＧＥ检测蛋白２６１４．蛋白离子交换２８１．５蛋白凝胶过滤层析２８１６二－ＭＳＭＳ）鉴２９．蛋白条带级质谱（ＬＣ／定１．７数据处理２９２结果与分析３０２．１基因组测序、组装和注释３０２．２蛋白提取、分离及杀虫活性鉴定３０２３二蛋白质级质谱鉴定３５２．４基因及蛋白序列分析３６３

8、．小结与讨论３７第四章ｓｒ－／和ｓｒ－２基因的原核表达及活性研究３９１材料方法３９１１．主要试剂３９１．２ＰＣ民４０１．３ＰＣ民产物回收４１１．４酶切、连接及转化４１１５ＧａｔｅｗａＢＰ．ｙ反应４２１．６