益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生功能及心肌梗死患者mir-223-3p、mir-132-5p影响的研究

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1、分类号：单位代码：１０４４１‘心‘：密级：学号２００８８０７１葵＇＠山系中彦爲义葦＾、绳招硕±化文＇诚、ｊ中文题目：益气活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞血管新生功能及心肌梗死患者ｍ－－ｉＲ２２３化、Ｒ－－ｍｉ１３２５ｐ响的硏究影央文遇目：Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｕｌｅｍｅｎｔｉｎｉａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｎｂｌｏｏｄｐｐｇｑｇｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｏｎｔｈｅａｎｉｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｒａｔｉｓｃｈｅｍｉｃｇ＊ｃａｒｄｉａｃｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏ

2、ｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｔｈｅ－＿－ｅｘｒｅｓｓ－ｉｏｎｏｆｍｉＲ２２３３ａｎｄｍｉ民ｌ３２５ｉｎｔ红ｐｐｐｈｅｌａｓｍａｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉ化ａｃｕｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｐ化ｐ申请人姓名姚静入学年月２００８年９月学科专业中医内科学指导教师戴国华学位类型临床医学专业学位（韦年制）２０１５年５月２０曰原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成的，文中除注明引用的内容外，不包含任何其他己经发表的科研成

3、果。对本文研究做出重要贡献者，均已在文中Ｗ明确方式表明。本声明的法律责任完全由自己承担。论文作者篇名却以导师簽名日韦畫关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部ｎ机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权山东中医药大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库迸行检索，可レッ采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论义作者签名純将导师综名載阁曰期斗提要目的1.观察益气

4、活血中药对大鼠缺血心肌微血管内皮细胞（CMECs）增殖、迁移和管腔结构形成不同环节的干预作用，及其对细胞增殖相关蛋白激酶（ERK）和细胞死亡相关分子（p53）mRNA表达的影响，明确其促血管生成作用的生物学效应及最佳剂量。2.研究益气活血中药干预下心肌梗死患者血浆miR-223-3p、miR-132-5p的动态变化，为中医药治疗心肌梗死提供临床依据。方法1.实验研究选取220-280g成年雄性SD大鼠，通过结扎左侧冠状动脉前降支（LeftAnteriorDescendingCor,LAD）建立心肌缺血模型，植块法培养CMECs。动物灌胃

5、法制备大鼠芪参益气滴丸高剂量（Q-G）、中剂量（Q-Z）、低剂量（Q-D）含药血清，分别与大鼠缺血CMECs共孵育。同时制备空白血清，分别与心肌缺血模型大鼠（MX）、正常大鼠（ZC）来源的原代CMECs共孵育。观察血管新生的生物学特征，噻唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线并检测细胞增殖能力，划痕法测定细胞迁移能力，倒置相差显微镜下观察成管情况,确定CMECs血管新生的迁移、增殖、成管的窗口期；实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测ERK和p53mRNA的表达情况。2.临床研究选择急性心肌梗死（AMI）患者30例，健康志愿者1

6、0例。将AMI患者随机分为治疗组和对照组各15例。治疗组予常规西药联合益气活血中药治疗，对照组予常规西药治疗。健康志愿者于入组时，治疗组和对照组于入院后1h及治疗后第3天、第7天、第14天时抽取肘静脉血，real-timePCR检测miR-223-3p、miR-132-5p的表达情况。结果1.实验研究（1）本研究共涉及雄性SD大鼠39只，其中灌胃20只,心梗模型19只。每只灌胃大鼠最终可经腹主动脉抽取血清5-10ml。大鼠急性心梗模型手术成功率为89.47%，模型大鼠24h至72h内死亡1只,急性期存活率为94.12%。（2）心肌细胞培

7、养结果回示，增殖窗口期Q-Z、Q-D组为第2天，Q-G、ZC组为第3天，MX组为第6天；迁移、成管窗口期各组均分别为12h及第2天。Q-G、Q-Z、Q-D组增殖率、迁移率及成管率均高于MX组，其中Q-D组增高最明显（P<0.01）；Real-timePCR检测结果表明，与MX组比较，Q-G、Q-Z、Q-D组ERKmRNA表达增加，p53mRNA表达降低（P<0.05）。2.临床研究（1）中医症状积分比较治疗前，治疗组和对照组中医症状积分为19.73±5.21、20.62±4.34，两组比较无统计学差异（P＞0.05）。治疗后，治疗组和对

8、照组中医症状积分为6.42±3.56、11.47±4.26，两组比较有显著差异（P＜0.01）。（2）心电图疗效比较总有效率治疗组为78.57%，对照组为64.29%。经秩和检验，有统计学差异（P=0.03