猪瘟病毒2.1基因亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析

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1、分类号：S852.65单位代码：10193密级：公开学号：2012658硕士学学位位论文猪瘟病毒2.1基因亚型野毒株的体外细胞传代适应与全基因组序列分析Invitroisolationandcelladaptationofwildtypeclassicswinefevervirussub‐subgenotype2.1anditsfullgenomicsequence作者姓名：谢晓明学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物病毒学指导教师：王全凯所在学院：动物科学技术学院二〇一五年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文

2、中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可

3、以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日吉林农业大学硕士学位论文摘要摘要猪瘟（Classicalswinefever,CSF）是由猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus,CSFV）引起的一种严重危害全球养猪业的烈性传染病。CSF在

4、全球范围内流行，给全世界各地的养猪业造成了巨大的经济损失。CSFV只有一种血清型，根据病毒基因组5’NTR、E2和NS5B等基因区段的核苷酸序列的差异可将CSFV分为3个基因型，其可进一步分为11个基因亚型（1.1~1.4；2.1~2.3；3.1~3.4）。涂长春等于上世纪九十年代对全国30个省市CSFV临床样品进行病原生态学和分子流行病学调查，研究发现在我国流行的CSFV主要是2.1、2.2、2.3和1.1亚型，而2.1亚型和2.2亚型作为优势毒株在我国的流行范围更广，呈全国性分布。由于2.1基因亚型存在较大的遗传多样性，进而又将其分为2.1a、2.1b、2.1c和2.1d基因亚亚型。陈宁

5、等人对2004至2007年采集自我国华南地区的35份CSFV阳性样品调查时发现，其中34份样品为2.1b亚亚型，只有1份采集于2004年的阳性样品为2.2亚型。这说明2.1亚型是华南地区的主要流行毒株。2009年在我国陕西省首次分离获得了一株2.1a亚亚型毒株SXCDK，蒋大良等报道在湖南和广东等地区流行CSFV2.1c亚亚型的毒株。目前，由于CSF流行在有些国家和地区得到有效控制，有些国家已宣布彻底消灭了CSF，这也使得一些当年的流行毒株成为历史，比如曾在欧洲流行的基因1.1亚型和曾在亚洲流行的3.3和3.4亚型，近年来已鲜有报道。然而，基因2型悄然成为在世界各地广泛流行的优势毒株。20世

6、纪90年代欧洲许多国家曾暴发2.1亚型毒株引起的CSF疫情，而近年来的报道则以2.2亚型和2.3亚型居多。在我国，2.1型毒株也是主要流行毒株。本实验利用RT-PCR从三个广东某猪场的疑似CSF病例中检测出CSFV，并对扩增的E2全长基因进行了序列测定和系统进化分析。结果表明，引发这3起猪瘟疫情的毒株分别属于CSFV2.1b基因亚亚型，命名为GD176；CSFV2.1c基因亚亚型，命名为GD53；CSFV2.1d基因亚亚型，命名为GD19。为了进一步了解该些毒株的复制特点，实验利用PK-15细胞对三株流行毒株进行了体外细胞适应性传代，并对获得的细胞适应毒F46进行了全基因组测序。结果表明三株

7、流行毒株通过在PK-15上不断传代，最终获得了高滴度的适应毒株，GD176的2.68.17滴度从第6代的10TCID50/mL提高至第46代的10TCID50/mL，GD53的滴3.398.53度从第6代的10TCID50/mL提高至第46代的10TCID50/mL，GD19的滴度I吉林农业大学硕士学位论文摘要2.547.88从第6代的10TCID50/mL提高至第46代的10TCID50/mL。病毒生长动力