湘产百合的srap分析与核心种质库的初步构建

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1、分类号：学校代码：学号：：级：湖南中医药大学硕士学位论文湘产百合的分析与核心种质库的初步构建学科专业：中药学研究方向：临床中药作者姓名：导师姓名、职称：易刚强副教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位学位或证书而使用过的材料。与我共同对本研究所作的贡献的同志均已在论文中作了明确说明。关于学位论文使用授权说明本人了解湖南中医药大学有关保

2、留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。年月曰湖态肀豸太旁一硕士学位论文届摘要百合集药用、食用、观赏于一身，具有广泛的开发前景。百合种质资源丰富，湖南为我国百合主要产区，百合产业已初具规模。为更好地保存和开发湘产百合种质资源，本研宄运用分子标记技术，对按照抽样比例在份湘产百合种质中所抽取份种质的亲缘关系、遗传多样性进行分析，初步探究百合核心种质的构建方法，填补了百合在核心种质构建方面

3、的研宄空白，研宄结果将对其他中药材资源的收集保护、研宄及育种工作具有指导意义。主要研究结果如下：确定了适合分析的百合基因组提取方法，即改良法。在传统提取方法基础上，根据百合鳞叶的特殊性进行改良和优化，增加巯基乙醇用量，且在使用前加入的疏基乙醇，并降低水浴温度（°，减免了多酚氧化，进一步去除多‘结合正交设计和单因素试验对湘产百合体系进行优化，最佳反应体系为浓度，浓度，引物浓度，叫酶，模板。从对引物组合中筛选出对产物稳定、多态性丰富的引物组合，并确定其最佳退火温度。对份百合初级种质共扩增出个位点，多态位点个，物种水平上多态性比率为，基因多样度指数丑

4、，遗传多样性，信息指数，遗传距离变化范围为。百合种质聚类分析结果表明：在相似性阈值为的条件下，将供试样品划分为大类，即种质来源于隆回、浏阳、平江等地所代表的百合为一大类，种质来源于龙山、耒阳、永顺等地所代表的卷丹为第二大类。聚类结果提示大部分供试样本与地理位置分布有一定关联性，并具有明显的海拔相关性，人工栽培品种与野生种之间的遗传背景存在一定的差异，但并未表现出较大的遗传距离。根据数据聚类结果，对份百合初级种质采用种方法构建核心种质，通过等位基因数、有效等位基因数、遗传多样性指数和阚态肀裱大嗲一硕士学位论文届信息指数的对比，表明采用根据相似性阈

5、值的分组取样策略获得的核心种质代表性较好。确立湘产百合种质资源的核心种质库（个样本）编号：、、、、、、、、、、、、、、，核心种质的有效等位基因数、’遗传多样性指数和信息指数保留率在以上，核心种质能很好的代表初始种质。关键词：百合；核心种质；遗传多样性；种质资源湖泰十获穗大嗱一硕士学位论文届：，，，，，，，_秦中豸大摩一硕士学位论文届，，，，，，；；湖态肀太摩一硕士学位论文届缩略词英文缩写英文名称中文名称扩增片段长度多态性碱基对十六烷基三甲基溴化铵核苷酸溴化乙锭乙二胺四乙酸简单重复序列间区开放式阅读框聚合酶链式反应随机扩增多态相关序列扩增多态性磷

6、酸缓冲液缓冲液三羟甲基氨基甲烷煳杰肀祷大嗲一硕士学位论文届目录弓百合种质概况分子标记技术百合的研究进展中药材核心种质构建本研究的目的及意义实验材料胃材试剂实验仪器设备实验地实验方法基因组提取质量检测核酸蛋白伩检测电泳检测反应湖态肀滿犬摩一硕士学位论文届扩增程序反应体系的优化弓物筛选退火温度的优化反应与产物检测核心种质构建方法逐步聚类取样法分组抽样法数据條技术路线结果与分析浓度和纯度检测核酸蛋白测定电泳检测反应条件优化正交试验分析单因素实验引物筛选结果退火温度确立扩增产物电泳结果遗传多样性分析聚类结果核心种质的确立湖杰肀《豸太摩一硕士学位论文届植

7、物基因组提取反应的体系优化误差及稳定性讨论雜分析核心种质评价核心种质的代表性、异质性和多样性核心种质取样方法核心种质的取样比例百合种质资源的保存结论和展望结论展望本课题的创新点参考文献附录文献综述附录硕士期间发表论文附表所有位点基因统计摘要附表份百合种质的遗传相似系数附图对引物的扩增带谱图?湖；中為太摩一硕士学位论文潘引言百合种质概况百合最早记载于《神农本草经》，因其根莲由多数肉质鳞片抱合而得名，且其形似蒜，其味似薯，故又名夜合、中蓬薯、蒜脑薯、強瞿等。中医认为百合具有养阴润肺，清心安神之功效。《中国药典》规定百合药材以卷丹、百合、细叶百合的干

8、燥肉质鳞叶入药⑴，含有阜苗、生物碱、多糖、磷脂等活性成分，具有抗疲劳、抗肿瘤、调节免疫等药理作用。我国为百合的主要起源地，使用历史悠久。百合经过长期自