海南竹柏扁枝病病原分子生物学鉴定研究

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1、学校代码：学号：分类号：密级：綠大營硕士学位论文题目、海前、好生嘛棘龍作者杨静宇指导教师罗大研究员专业森林保护学时间二—五年五月MolecularidentificationofaphytoplasmaassociatedwithPodocarpusnagifasciationinHainanAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementForthemaster'sDegreeinEnvironmentandPlantProtectionByYangJing-yuSupervisor:LuoDa-quanMa

2、jor:ForestProtectionSubmittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年夕月日学位论文版权麵授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论

3、文被查阅和借阅。学校可以为存在馆际合作关系兄弟髙校用户提供文献传递服务和交换服务本人授权海南大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：嫩导师签名：日期年月日日期：乃作年厂月，曰本人已经认真阅读“高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。同意论文提交后滞后：口半年：口一年二年发布。论文作者签名：导师签名日期：年叫日日期疒月，曰摘要近年来在海南万宁热带植物园的竹柏树上发

4、现了枝条侧向分支无法独立于主枝生长而呈扁平带状或鸡冠状的病害症状，疑似植原体侵染的表现症状。本文应用组织化学、电子显微镜观察和分子生物学方法对海南竹柏扁枝病的病原开展研究，主要结果如下：表现典型扁枝症状的竹柏嫩茎切片后用荧光染料染色，通过激光共聚焦显微镜观察在横切面韧皮部发现特异性蓝色荧光，而在健康的海南竹柏样本对应部位未发现特异性蓝色荧光。该结果表明感病的海南竹柏嫩茎中可能含有植原体。对表现典型扁枝症状的竹柏嫩茎切片后进行透射电子显微镜观察，在茎横切面韧皮部筛管细胞中观察到典型的圆形或椭圆形植原体，与组织化学检测的可能含有植原体的部位相符，而在健康的海南竹柏样品中

5、没有观察到植原体的存在。从海南万宁热带植物园中表现典型扁枝症状的竹柏样本提取总，利用植原体基因通用引物对和进行巢式检测，扩增到大小约为的植原体特异片段（登录号：对扩增片段进行克隆，测序、序列同源性分析结果表明，该片段与植原体候选种（登录号的同源性为进一步虚拟分析表明，该植原体属于花生丛枝植原体组（的一个新亚组，与其相似性最高的是亚组（相似系数为。利用植原体延伸因子基因的通用引物对进行反应，扩增到大小约的特异性片段（登录号：，对扩增片段进行序列比对分析，分析结果显示与该植原体相似性最高的是组的仙人掌丛枝植原体（登录号核苷酸同源性达，氨基酸同源性达。本论文应用组织化学检

6、测法、电子显微镜显微镜检测法和分子生物学方法对竹柏病枝病病原，进行检测鉴定并确定了病原的分类地位，这是我国初次报道在竹柏植株上感染植原体。关键词：竹柏；扁枝病；植原体；组织化学检测；电子显微镜检测；分子生物学鉴定AbstractThefasciationdiseaseofPodocarpusnagi(Thunb.)Zoll,etMorexZollwasfoundrecentlyintheTropicalBotanicalGarden,Wanning,Hainan.ThemajorsymptomassociatedwithfasciationofP.nagiwasth

7、eshootapicalmeristembroadenedwithflatstripincristante.,Thesymptomofthisfasciationdiseasewassimilartothesymptomthatcausedbyphytoplasma.TheobjectiveofthisstudywastoclassificationandidentificationofthepathogenassociatedwithfasciationofP.nagiusinghistochemistrydetection,transmissionelect