文昌鱼补体因子c1q和c3a基因的鉴定、表达和功能研究

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1、巧斯义々雜）呼ｆ＾２２２２＾ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ博±学位论文ＤＯＣＴＯ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ文昌鱼补体因子Ｃｌｑ和Ｃ３ａ论文题目；基因的鉴定、表达和功能研究Ｉｄｅ打ｔｉ巧ｃａｔｉｏｎｅｘｒｅ巧ｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃ化ｒｉｚａｔｉｏ打ｏｆ，ｐ英文题目ｏｎｅｎｌ－ｕｎａｍｘｕ：ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔｃｏｍｐｔｓＣｑｌｉｋｅａ打ｄＣ３ａｍｏｌｅｃｌｅｓｉｐｈｉｏｓ作者：高瞻指导教师：张±理教授学

2、位类别；学术学位专业名称：海洋生物学研究方向；发育和进化生物学＇．－－．去盛ＸｉＮｉ瓣Ｖ谨从此论文献给恩师张±瑣教授、我的家人和所有关爱我的朋友们！—高瞻文昌鱼补体因子Ｃ１Ｃ３ａ基因的鉴定ｑ和、表达和功能研究Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｈａｒａｃｔ；ｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｏｍｌｅｍｅｎｔｃｏｍｏｎｅｎｔｓＣｌ－Ｕｋｅａ打ｄＣ３ａｍｏｃｕｌｅｓｉｎｐｐｑｌｅａｍｐｈｉｏｘｕｓ．备－学位论文答辩日

3、期：作／指导教师签宇：媒三龄答辩委员会成员签字：巧基独幼黄明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除，论。据我所知了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注＝如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期许占月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了

4、解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构（如中国科学技术信息研究所等）送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可ｙｘ将学位论文的全部或部分内容编レ入有关数据库进行检索，ッ采用影印可、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年＾月／日签字日期：年＾月日／学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编文昌鱼补体因子仁Ｉ和Ｃ３ａ基因的繫定、表达和巧能硏兒ｑ

5、文昌鱼补体因子Ｃ１ｑ和Ｃ３ａ基因的鉴定、表达和功能研究摘要文昌鱼是研究脊椎动物起源与进化的重要模式动物，研究文昌鱼补体系统有助于追潮脊椎动物补体系统的起源。补体系统是先天性免疫的重要组成部分，它能够帮助抗体和吞嗤细胞清除病原微生物，从而起到连接先天性免疫和获得性免一３条途疫的重要作用，其激活途径般认为有经典途径、替代途径和凝集素途径Ｃｌ３ａ，径。我们从文昌鱼体内克隆得到补体类ｑ基因和Ｃ基因并进行了表达和功能研究。具体结果如下。一Ｃｌ－ｌｉｋ在对文昌鱼基因组中ｑｅ基因分析之后，我们从中选择并克隆了

6、个与－脊椎动物Ｃｌｑ序列相似度高、含有与ＩｇＧ、ＣｌｒＣｌｓ结合关键位点的基因。进化直系同源民－分析显示该基因与脊椎动物Ｃｌｑ，因此我们将之命名为巧Ｃｌｑ。ｅａｌｔｉｍｅＰＣ民分析表明巧Ｃｌｑ基因在文昌鱼肝盲囊、后瞭和脊索大量表达，并且其表达量在文昌鱼受到免疫刺激（细菌，、脂礎壁酸或脂多糖）之后显著上升这表明巧Ｃｌｑ参与免疫相关功能。接着，我们重组表达并纯化了巧Ｃｌｑ蛋白及它的胶原结构域和ｇＣｌｑ结构域，并利用ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、溶血活性测定、亲和层析等技术，重点研究了巧Ｃｌｑ是否

7、具有参与经典激活途径的能力。我们发现重＾组表达的巧Ｃｌｑ可以形成多聚体，这是Ｃｌｑ激活经典途径所必需的。与人Ｃｌｑ一，（：：１＜：：１憐壁酸，蛋白样巧９及其３９结构域能够与脂、脂多糖结合甚至还能与＾人ＩｇＧ结合。与屯蛾媛Ｃｌｑ不同的是，巧Ｃｌｑ不具备凝集素活性。更重要的是，将巧Ｃｌ加入去除了Ｃｌｑ的人血清后，补体经典途径的溶血活性得Ｗ恢复ｑ。我一－ＣＣｌ们还进步证实巧Ｃｌｑ能够结合并激活人Ｃｌｒｌｓ。Ｗ上结果表明，巧ｑ具有参与经典激活途径的能力。为了深入探索文昌鱼体内是否存在类Ｃｌｑ介导的补体激活

8、系统，我们又进行一－了下面，利用ｐｕｌｄｏｗｎ技术分离并鉴定了Ｃｌ互作蛋白，系列实验。首先ｌ巧ｑ的该蛋白含有Ｈ个免疫球蛋白结构域ＩＳＦ－Ｃｌ，故命名为巧ＩｇＳＦ。巧ｇ巧ｑ的结合与ＩＧ－ＣＣ４和Ｃ３沉降实验结ｇｌｑ的结合相似，都具有激活经典途径的能力。另夕ｈ果