红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究

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1、学校编码10390分类号TS254学号201212470053密级农业推广硕士专业学位论文红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究指导教师：刘光明教授黄建炜主任技师作者姓名：蔡薇申请学位级别：硕士领域名称：食品加工与安全论文提交日期：2017年12月10日论文答辩日期：2017年12月11日学位授予单位：集美大学学位授予日期：2017年12月答辩委员会主席：曾润颖研究员农业推广硕士专业学位论文红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究Studyonthecompositionanalysi

2、s,invitroimmunostimulatoryandanti-antibacterialactivitiesofpolysaccharidesisolatedfromBangiafusco-purpure作者姓名：蔡薇指导教师：刘光明教授黄建炜主任技师领域名称：食品加工与安全学位授予单位：集美大学论文答辩日期：2017年12月11日红毛藻多糖组成分析、体外免疫诱导活性及抑菌活性研究摘要红毛藻（Bangiafusco-purpure）在福建、广东沿海分布较广，近年来经过规模化的栽培，福建省莆田市南日岛镇

3、已成为主要产地之一。红毛藻藻体富含多种天然活性物质，其中多糖类物质是其发挥生理活性的主要成分之一。本文对红毛藻多糖进行提取、分离和纯化，通过对红毛藻多糖的基本组成进行分析和研究红毛藻多糖的体外免疫调节活性和抑菌活性，明确红毛藻多糖的基本组成特征和阐明红毛藻的食药用活性机理。1、通过Dowex柱层析和SephadexG75柱层析对红毛藻粗多糖进行初步纯化获得多糖BFP，进一步通过DEAECellulose52柱层析对BFP进行分级纯化，得到三个多糖组分F1、F2和F3，其得率分别为40.8%、26.0%和6.

4、8%。2、单糖组成和化学成分分析结果表明，以葡萄糖的摩尔数为1换算，BFP主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸组成，并含有少量岩藻糖、木糖和阿拉伯糖，其单糖组成摩尔比为1.02：1.00：11.23：1.14：0.34：0.35：0.16，硫酸基团含量为10.34%，蛋白质含量为0.31%；F1主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和岩藻糖组成，其单糖组成摩尔比为0.62：1.00：1.43：0.51：0.50，硫酸基团和蛋白质含量分别为2.73%和0.15%；F2主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖

5、组成，其摩尔比为1.38：1.00：1.15：1.12，硫酸基团和蛋白质含量分别为3.09%和0.15%；F3的主要单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸，其摩尔比为1.99：1.00：0.53：2.92：0.29，硫酸基团和蛋白质含量分别为2.20%和2.19%。3、利用小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞模型，研究了红毛藻多糖BFP、F1、F2、F3的免疫调节活性。结果表明BFP、F1、F2、F3均能显著诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-，且F1和F2显示较强的诱导活性，表

6、明红毛藻多糖BFP及其多糖组分F1、F2、F3具有强效的免疫诱导活性。4、利用MAPK信号通路抑制剂和NF-B信号通路抑制剂研究了红毛藻多糖诱导RAW264.7细胞活化释放NO和分泌TNF-的作用机制。由结果推断红毛藻多糖BFP分别通过激活NF-B、JNKMAPK、ErkMAPK和NF-B、ErkMAPK、p38MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞释放NO和分泌TNF-；F1分别通过激活NF-B、JNKMAPK和JNK、ErkMAPK、p38MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞释放NO和

7、分泌TNF-；而F2和F3作用机制相似，分别通过激活细胞的NF-B、JNKMAPK和NF-B、JNKMAPK、ErkMAPK信号通路诱导其释放NO和分泌TNF-。I5、通过营养肉汤微量稀释法评价了红毛藻多糖BFP、F1、F2和F3对5种常见食源性致病菌（大肠埃希氏菌Escherichiacoli、金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus、鼠伤寒沙门氏菌Salmonellatyphimurium、副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus、单核细胞增生李斯特氏菌Liste

8、riamonocytogenes）的体外直接抑菌活性。结果表明，在测定浓度0～500g/mL范围内，多糖BFP在浓度达到125g/mL时对S.aureus具有显著抑菌活性，并呈现多糖浓度依赖性，在浓度达到500g/mL时对E.coli呈现抑菌活性；多糖组分F1在浓度达到125g/mL时对S.aureus表现出显著抑菌活性，并呈现多糖浓度依赖性；多糖组分F2在浓度达到125g/mL时对S.typhimur