携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及其机制研究

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1、分类号：密级：研究生学位论文携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及论文题目（中文）其机制研究Effectofoxygen-ladenmesenchymalstemcell论文题目（外文）ongastriccancerchemotherapyanditsmechanism研究生姓名周雅丽学科、专业外科学消化系肿瘤研究方向学位级别博士导师姓名、职称李玉民教授论文工作起止年月2012年9月至2015年9月论文提交日期2015年9月论文答辩日期2015年11月学位授予日期校址：甘肃省兰州市原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立进行研究所取得的

2、成果。学位论文中凡引用他人已经发表或未发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已经注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究成果做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：日期：关于学位论文使用授权的声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属兰州大学。本人完全了解兰州大学有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权兰州大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

3、行检索，可以采用任何复制手段保存和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为兰州大学。本学位论文研究内容：□可以公开□不宜公开，已在学位办公室办理保密申请，解密后适用本授权书。（请在以上选项内选择其中一项打“√”）论文作者签名：导师签名：日期：日期：携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及其机制研究中文摘要目的：胃癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤，作为胃癌主要治疗手段的化疗其耐药问题日益严重，缺氧是造成胃癌化疗耐药的重要原因。本课题利用间充质干细胞对胃癌的靶向趋化性，构建表达血红蛋白的间充质干细胞，使其充分携

4、氧后作用于缺氧的胃癌细胞，给予临床比较常用的胃癌化疗药物，观察携氧后的间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响，并从分子水平探讨其影响胃癌化疗效果可能的机制，以确定这种靶向治疗方法的可行性方法：贴壁法培养间充质干细胞及胃癌细胞株MKN-45及SGC-7901，流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志，利用慢病毒感染使血红蛋白基因表达于间充质干细胞并测序验证，筛选出稳转细胞株后，利用IPTG和血红素诱导血红蛋白的表达，westernblotting法检测蛋白表达情况。Transwell法检测表达血红蛋白的间充质干细胞是否具有向胃癌细胞株MKN-45及SGC-7901迁移的能力。

5、将此MSC-hemo置于适宜的氧环境中使其充分携氧后研究其对胃癌细胞化疗的影响。分别检测携氧间充质干细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）及顺铂（CDDP）杀伤胃癌细胞功能的影响。设空白对照组、单纯化疗药物组及携氧间充质干细胞联合化疗组，利用MTT法分别检测各组胃癌细胞的活性，流式细胞术对干预前后细胞的凋亡情况进行检测。Trizol法提取干预前后两株胃癌细胞RNA后，实时荧光定量PCR法对干预前后胃癌细胞中HIF-1α、MDR1及VEGF基因表达情况进行检测分析，应用SPASS17.0软件统计学分析各组之间差异，当p<0.05时认为有显著性差异。结果：培养的间充质干细胞

6、及胃癌细胞均符合其标准生物学特点。测序结果显示表达于间充质干细胞中的血红蛋白基因序列符合Genebank中HBA2及HBB基因序列。病毒转染率达到80%，感染复数（MOI）为10。经IPTG及血红素诱导后，Westernblotting能够检测到血红蛋白的表达。Transwell结果显示与普通的间充质干细胞一样，表达血红蛋白的间充质干细胞也具备向胃癌细胞迁移的能力。MTT实验及统计分析结果显示与单纯的化疗相比，携氧间充质干细胞联合化疗组对各株胃癌细胞的抑制率更高，凋亡检测结果也显示携氧间充质干细胞干预组具有更高的凋亡率。对各组HIF-1α、MDR1及VEGF基因

7、表达的定量PCR检测结果表明：不论是对于MKN-45细胞株还是SGC-7901细胞组，与未加任何干预的细胞相比，携氧间充质干细胞干预组细胞中HIF-1α、MDR1及VEGF均I表现出明显的下降趋势。结论：我们的结果表明携氧间充质干细胞能够明显增强胃癌的化疗效果，利用间充质干细胞作为一种携氧工具为实体瘤补氧是一种新奇的改善肿瘤局部缺氧环境的方法，能够改善胃癌化疗治疗的效果。进一步研究表明此作用的靶点是HIF-1α基因，进而影响了其下游相关基因MDR1、VEGF的表达从而影响胃癌的化疗效果。关键词：间充质干细胞，胃癌，缺氧，化疗，机制IITheeffectofoxy

8、gen-ladenmes