成年健康绵羊胃肠道菌群的研究

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1、－－Ａ．．．－Ｖ，３９期Ｓ８２６．８＋２：２３分类号０９；学号Ｓ２０１５１７四川巧幽大学顾±学位论义■＊；；＊＼成年健康绵羊賈肠道菌群的研究曾燕指导教师：倪学勤教授学科专业：预防兽医学－年＇研巧方向：动物微生态学Ｓ＂％－２０１５年６月一－：击—ｒ—．＂＇成六ＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｅｄ１：０ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆｔｈｅＲｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｆｏｒＭａｓｔｅｒＤｅｇ

2、ｒｅｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅ出ｖｅｒｓｉｔｙｏｆｂａｃｔｅｒｉａｃｏｍｍｉｍｉｔｉｅｓａｌｏｎｔｈｅａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｇｇｔｒａｃｔｏｆａｄｕｌｔｈｅａｌｔｈｓｈｅｅｙｐＺｅｎＹａｎｇＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＮ－ｎｉＸｕｅｑｉ’ＹａａｎＳｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａ，，Ｊｕｎｅ２０１５，论文独削性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不位含

3、为获得四川农业大学或其它教育机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献巧己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧生签名２。｛＾年月曰＿＾嗦擦关于论文使用授巧的寅明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。＾＾＾论。□本论文保密，在后适用本授权。文不保密＿＿年解密＂＂（请在Ｗ上□内划Ｖ）研

4、巧生签名：２〇１年月（曰（啤软了导师签名：＞〇＾＾串《月／／日摘要本研究成年健康绵羊为对象，研究其胃肠道细菌菌群多样性及下酸产生菌的分５布规律。选用只成年健康的中国蒙古羊，无菌操作采集４个胃（瘤胃、网胃、瓣胃和皱胃）、小肠（十二指肠、空肠和回肠）和大肠（盲肠、结肠和直肠）的新鲜内容－ｍｅｒａｓｅｃｈａ－ｔ物。采用聚合酶链式反应变性梯度凝胶电泳（Ｐｏｌｙｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｄｅｎａｕｒｉｎｇｄｅｉｓ－－－ｒａｉｅｎｔｅｌｅｌｃｔｒｏｈｏｒｓＰＣＲＤＧＧＥ技术、实时英光定量（ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ，ＲＴＰＣＲ）ｇｇｐ，）技术和ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉ

5、Ｓｅｑ高通量测序技术检测绵羊胃肠道细菌和下酸产生菌，结果如下：－１．ＰＣＲＤＧ邸检测发现，绵羊整个胃肠道细菌多样性较好。聚类分析和主成分一（ＰＣＡ）分析均显示来自胃、小肠和大肠的样品分别聚类在起。胃和大肠样品的细．菌多样性高，平均条带数分别为２２５５条和２７．８０条，其中，皱胃、盲损、结肠和直肠样品细菌多样性指数、均匀度和丰富度较高，皱胃为３．１９、０．８２、２５．２０，盲肠为３、、、、、、．．２７０．８４２６．４０，结肠为３．２８０．８４２６．８０，直肠为３．４００．８７３０２小肠样；而品细菌多样性较低，平均条带数为６．２０条，且空肠样品细菌的多样性指标最低，仅

6、１、。为２．２７０．５８和１０条带的克隆测序结果显示，１１个测序条带的细菌分别来自厚璧菌口和拟杆菌口，包括未培养巧杆菌口细菌、未培养瘤胃细菌、未培养细菌、未培养韦荣氏球菌属、不动杆菌属和Ｚａｃ／ｏｃｏｃｃｗ。２．ＰＣ民，实时英光定量检测发现绵羊胃肠道含有种类丰富的微生物，来自胃和大肠样品的菌群数量均高于小肠样品。厚壁菌口、郭酸菌、肠球菌和双歧杆菌的数量在胃肠道差异显著（戶＜〇．〇５）；而拟杆菌口、梭菌类群ＸｒＶａ、梭菌类群ＩＶ、柔嫩梭菌群、埃氏巨球形菌和溶纤维了酸弧菌的数量在胃肠道无显著差异（户＞０．０５）。厚壁菌口的数量在十二肠和空厥中差异极显著（戶＜０．０１）

7、；而厮球菌和双歧杆菌的数量在皱＜０．０１）的数量则在回肠中差异极显著（戶＜０胃和回肠中差异极显著（户．０１）。；乳酸菌Ｓ．ｍｕｍｉｎａＭ设巧检测发现，共检测出５５７６巧条厚列，平均每个样品有１５９巧条序列；共获得１６２５２个物种分类的ＯＴＵｓｅｒａｔｉｏｎａｌＴａｘｏｎｏｍｉｃＵｎｉｔｓ，平巧每个样品为（邸）４６４个ＯＴＵｓ２５２ｂ。在口的分级水平上，１１个口；平均读