恶性疟原虫酸性钙体的分离纯化及其蛋白质组学研究

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1、分类号密缴ＵＤＣ编号讀＾讀抑爹頭壬学位论文恶性拒原虫酸性巧体的分离纯化及其蛋白质姐学研究Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｒｏｔｅｏｍｉｃｓｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅ，ｐｐＡｃｉｄｏｃａｌｃｉｓｏｍｅｓｉｎＰｌａｓｍｏｄｉｕｍａｌｃｉａｒｕｍｆｐ佟澄碧导师姓名郝文波专业名称免疫学培养类型学术型论文提交日期２０１５年５月３１日南方医科大学２０１２级硕ｉ学位论文恶幽無虫酸龄丐醜分融似琪蛋白騰＆学脈Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｕｎｆｉｃａ村ｏｎａｎｄｒｏｋｏｍｉ

2、ｃｓｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｔｈｅ，ｐｐａｃｉｄｏｃａｌｃｉｓｏｍｅｓｉｎＰｌａｓｍｏｄｉｕｍａｌｃｉａｒｕｍｆｐ８１１７１６０８课题来源：国家自然科学基金（）专业名称免疫学学位申请人伶澄碧指导教师郝文波教授答辩姜员会主席朱家勇教授答辩委员会成员何庆瑜教授罗树紅教授吴英松教授于婷副研究员论文评阅人郑磊教授李学荣教授２０１５年５月３１日广州硕壬学位论文恶性拒原虫酸性巧体的分离纯化及其蛋白质组学硏究硕壬研究生：佟澄碧指导教师：郝文波教授摘要研巧背景及目的

3、：炬原虫属于真球虫目，血抱子虫亚目，炬原虫科，寄生于人体可Ｗ引起人类追疾。尤其是恶性追原虫（户／〇？？７〇施／ｍ诉崎ｗｒａｍ），与７５％的人类追疾有关叫追疾流行于１０２个国家和地区导致４亿人感染，虽然大多数患者能够治愈，口３００，】。至５可是仍有１万人死亡，其中Ｗ儿童占了多数今我国仍有约１个省（自治区）５４６个县（市）近３亿人口还在追疾威胁之中，南部恶性拒病例增多，因３【］此。Ｗ青嵩素为基础的联合疗，疮疾的防治在传染性疾病中仍然居于重要地位法一（ＡＣＴ）是目前治疗恶性拒疾这最致命的疾病形式最强有力的武器，其疗４５［，］效能达到９０％Ｗ上，

4、但近年来科学家们发现少数恶性拒原虫对青慧素、氯哇等药物表现出抗药性，在部分东南亚地区日益严重在柬辅寨和泰国边境地区近６７［，＾。期己确认出现青嵩素耐药性，送为拒疾的防治工作敲响了警钟开发抗拒疾新药不但至关重要而且面临着急迫性。一为了找到新的抗炬药物作用祀标，我们须进步研究茫原虫的结构及其特性，Ｗ找到有效的药物作用祀点，为研究抗追新药提供基础。寄生虫体内许多特殊的细胞器是寄生虫特有的，是宿主体内不存在的，通过对送些细胞器的结构和功能的深入研究，就有可能发现针对这些寄生虫的特一一ｎｅ异祀标（ＡｃｉｄｏｃａｌｃｉｓｏｉＡｃ）。近期研巧发现并命

5、名的个新细胞器酸性巧体，Ｉ摘要一一就是其中之。酸性巧体是种特殊的细胞器，由美国伊利诺依大学Ｄｒ．９Ｄｏｍ［８，３ｃａｐｏＲｏｂｅｒｔｏ教授的研巧团队首先在锥虫体内发现，因其富含钩和磯酸１３１＾７［［］］盐，呈酸性，故命名为酸性巧体随后又在利什曼原虫、弓形虫、炬１８心Ｐｉ［２２］口１［２４’２？８２９【］］［］［］原虫、艾美原虫、绿藻、霉菌、细菌气卵黄及人类血小板中均发现有该类细胞器的存在。相对于大家所熟知的细胞器，这种新近发现的ＰＷ细胞器为我们研究抗拒新药提供了更大可能性。２＋－研究发现，酸性巧体的膜上有许多累：如巧累（ＣａＡＴＰａｓ

6、ｅ）、质子粟＾＋＋＋－Ｖａｃｕｏ－－－（ｌａｒＨＡＴＰａｓｅＶａｃｕｏｌａｒＨｒｈｏｈａｔａｓｅ）、／氮粟（Ｎａ／Ｈ，ｐｙ邱巧钥２＋＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）、巧／氨系（Ｃａ／Ｈｅｘｃｈａｎｅｒ）和水蛋白通道（Ａｕａｐｏｒｉｎ）、离子ｇｑｎ［］通道等。其中，液泡型质子焦磯酸酶为酸性巧体所特有，已被应用为酸性巧［Ｗ体分离纯化及定位的标志。这些蛋白为酸性巧体的主要生理功能奠定了结构基础。酸性巧体的主要功能有４个：储存癖酸盐Ｈ，储存阳离子，调节ｐ值和调３２－３６［］节渗透压。这些成分对寄生虫的毒性、代谢和入侵宿主具有非常重要的作用。在对寄生虫

7、酸性巧体的研究中，Ｗ锥虫和弓形虫的研究最为深入，追原虫中也－＞８２０［］己证实有酸性巧体的存在，，但对其研究远不如锥虫和弓形虫深入其具体的结构、生物学功能和代谢特点尚未十分清楚。为了找到更多可作为抗炬新药鞭。标的蛋白，我们需要对恶性炬原虫酸性巧体进行蛋白质纪学分析研巧旅与结果：用传统方法从恶性炬原虫中分离、纯化酸性巧体非常困难。因为恶性炬原虫体外培养时，，其生长过程受血清影响很大很难标准化，因此很难获得足够量的虫体。本课题组在长期的恶性拒原虫相关研究过程中，建立了利用ＡｌｂｕＭＡＸＩ替代人血清培