应用套式pcr技术鉴定人粪中钩虫卵

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1、中国图书资料分类号学校代码：10679学号：Y2012103152015届硕士学位论文应用套式PCR技术鉴定人粪中钩虫卵TheApplicationofNestedPCRTechniquetoIdentifyHumanHookwormFromExcrementeggs学院（所)：基础医学院专业：病原生物学研究方向：医学寄生虫及其传染病年级：2012级研究生：刘晓辉指导教师：杨亚明教授二o—五年六月五日声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写

2、过的研究成果，也不包含为获得大理学院或其他教育机构的学位或证明而使用过的材料。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明，并表示了谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。研究生签名：釗版錄^日期：i论文使用和授权说明本人完全了解大理学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校:仏权保留并向P:l家有关部门或机构送交学位论文复印件和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存论文；授权学校将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。(保密的论文在解密后应遵循此规定）研究生签名

3、：别爽樣导师签名：泰？外H期：大理学院硕士学位论文目录中文摘要·········································································2英文摘要·········································································3前言··············································································5材料与方法··············

4、·······················································15结果·············································································23讨论和分析·····································································38结论···································································

5、··········40参考文献········································································41文献综述········································································461大理学院硕士学位论文应用套式PCR技术鉴定人粪中钩虫卵硕士研究生：刘晓辉指导老师：杨亚明摘要目的：从人类粪便标本中提取钩虫卵DNA利用套式PCR技术对寄生人粪的主要钩虫卵进行分类鉴定，探索通过从人类粪便中对钩虫进行分类鉴定与诊断

6、的新方法。内容与方法：实验分为现场采样和实验室检测两部分，现场工作主要是收集云南省西双版纳傣族自治州景洪市和勐海县多所小学四年级学生的粪便样本，采用改良加藤法对每份粪便样本进行“一粪三检”，经镜检确定寄生虫虫卵类型并且对各种虫卵分别进行计数，选取镜检含钩虫卵的39份粪便样本作为阳性样本和选21份不含钩虫卵(部分包含蛔虫)以及不含任何虫卵的粪便样本作为阴性对照样本。将样本置于95%的乙醇中于4℃冰箱保存准备下一步检测；实验室中将收集的标本采用用套式PCR扩增internaltranscribedspacer2（ITS-2）目的基因，测序并进一步BLAST比对，确

7、定钩虫种类；以此PRC产物片段为标志物，琼脂糖凝胶电泳判定阳性，即鉴定虫种。结果：经套式PCR扩增，通过BLAST比对，DNA序列与美洲钩虫核糖体基因的相似率均在99%，有1份样本与锡兰钩虫核糖体基因的相似率均在99%，即鉴定为美洲钩虫和犬钩虫。其检测敏感性92.31%（36/39），特异性33.33%(7/21)；22镜检和套式PCR检测结果经X检验，X=4.747，P=0.029，两种检测方法差异有统计学意义，套式PCR检出率(50/60)高于镜检(39/60)。结论：本实验建立了利用套式PCR对粪便中钩虫卵进行分型鉴定和检测的实验方法，并其检出率较改良加

8、藤厚涂片镜检法高，为实现通过粪检对多种