奶牛乳样和粪样中幽门螺杆菌pcr检测方法的建立及初步应用

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2、、？■＾学位类别兽医硕±、？、．，？？领域名称临床兽医学。、；守＾，■、．ｒ；言、苦，公．ｒ研巧方向兽医公共卫生、＇＇＇■■样？’’？、？、篆方、＇，，乂；．Ｖ許．、产片＇■—＇考．立＇、■’：－一、呼一－一＾＊ｇ？Ｊ’‘：２０１５年６月，＂－－４护－．，＇．：．，．ＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉ打ｅｄ１：０ＳｉｃｈｕａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ

3、ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｒｅｌｉｍｉｎａｒａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＣＲｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｙｐｐＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｌｏｒｉｉｎｔｈｅｍｉｌｋａｎｄｆａｅｃｅｓｏｆｄａｉｒｃｏｗｓｐｙｙＺｈａｎｇＹｕＤｉｒｅｃｔｅｄｂｙＳｕｉｚｈｏｎｇＣａｏｒｏｆｅｓｓｏｒｐＢａｏｎｉｎｇＷａｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｐｒｏｆｅｓｓｏｒＣｈｅｎｄｕＳｉｃｈｕａｎＣｈｉｎａｇ，，Ｊｕｎｅ２０１５，本研究

4、由四川省科技厅科技支撑项目（Ｎ０．２０１１ＮＺ００６０；Ｎ０．２０１１ＮＺ００３２）和四川农业大学学科建设双支计划（Ｎ０．３５７０８０６）资助ＴｈｉｓｗｏｒｋｗａｓｓｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＳｃｉｅｎｃｅ么ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｕｏｒｔＰｌａｎＰｒｏｅｃｔｏｆＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅｐｐｊ（ＮＯ．２０１１ＮＺ００６０ＮＯ．２０１１ＮＺ００３２）ａｎｄＴｈｅＳｈｕａｎｚｈｉｒｏｅｃｔ；ｇｐｊｏｆＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔ（Ｎ

5、Ｏ．３５７０８０６）ｇｙ论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果，，。尽我所知除了文中特别加标注和致谢的地方外学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：劲與／５年＾月吁曰关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ；学校

6、有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，化许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。论文不保密。□本论文保密，在＿年解密后适用本授权。＂＂（请在□内划Ｖ）研究生签名：年月１１导师签名：安心（ｒ年＾月，打＾中文摘要幽口螺杆菌（优庇〇６化化ｒ巧此的，邮）与上消化道及胃肠道外的多系统疾病相关，但至今其感染人的传染源和传播途径仍不明确。研究表明Ｈｐ可能

7、是种食源性致病菌，而牛乳，，、羊乳是其中最可能的感染来源。目前在幽口螺杆菌感染的众多诊断方法中，能检出样品中微量的Ｈ聚合酶链式反应相关技术因灵敏度高ｐ，而广泛应用于各临床样品中Ｈｐ的检测。本试验分别ｔＵ幽口螺巧菌７妨ｒ化Ｖ／４、如ｗＭ基因为範基因，设计特异性引物，建立奶牛乳样和粪样中幽口螺杆菌的ＰＣ民检测方法，并成功应用于奶牛临床样品的检测。１、ＨｐＰＣ民检测方法的建立：根据ＮＣＢＩ上己公布的Ｈｐ７份ｒｍ４、ｇ／ｗＭ８基因序列：Ｉ，设计特异性引物。提取片Ｗ／ｏｒＺ动物模型适应菌株Ｓ

8、Ｓ株菌液（ＩｘｌＯＣＦＵ／ＭＬ）ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板。模板浓度、退火温度、引物浓度及循环数等ＰＣＲ反应体系及条件经优化后得到＾＾下结果：２５＾０＾反应体系中，加入２｜ａＬ模板ＤＮＡ，７６Ｓ°°‘°°°？？？ＷＷ（ｒ、如》＾／基因分别在退火温度为５８０：６０：、４８Ｃ５０Ｃ、５８（：６０（：时２９４ｂ上下游引物？能扩増出７７７ｂｐ、４Ｈｂｐ、ｐ的目的条带；其中（