多基因遗传修饰猪体外抑制猪流感病毒增殖的初步分析

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1、密级:论文编号:中国农业科学院学位论文多基因遗传修饰猪体外抑制猪流感病毒增殖的初步分析SupressionofSwineInfluenzaVirusProliferationinvitroofPolygeneGeneticallyModifiedPorcine硕士研宄生：臧凤霞指导教师：孟庆文副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：哈尔滨兽医研究所中国农业科学院研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:武良时间：年5月沾日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文•同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容*研究生签名时间：缚年

3、j：月d曰导师签名：如大时间：年JT月沾曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目多基因遗传修饰猪体外抑制猪流感病毐增殖的初歩分析啓医微生物及其论文作者臧凤霞专业兽医专业研宄方向分子生物物学中国农业科学脘哈尔滨兽医指导教师孟庆文培养单位（研究所)研究所.姓名职称硕单位专业鍫名评-顿导口刘云教授东北农业大学博导0阅硕导口黄显会教授华南农业大学兽医药理人博导E1答辩主席重大疾病基硕导□吴英杰教授大连医科大学因工程換式博导E动物硕导□王靖宇大连医科大学实验动物学博导a硕导□仇华吉研究员哈尔滨&医研宄所预防倍医学博导

4、a答硕导B贾洪林副研究员哈尔滨#医研究所预防啓医学f叫博导口辩硕导0韩凌霞副研究员哈尔滨兽医研究所预防兽医学博导口委硕导口博导口员硕导口博导口硕导口博导口会议记录（秘书）赵丽丽论文答辩时间地点2015年5月26日哈尔沆兽医研究所学术报告厅密级：论文编号：中国农业科学院学位论文多基因遗传修饰猪体外抑制猪流感病毒增殖的初步分析SupressionofSwineInfluenzaVirusProliferationinvitroofPolygeneGeneticallyModifiedPorcine硕士研究生：臧凤霞指导教师：孟庆文

5、副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：哈尔滨兽医研究所中国农业科学院研究生院2015年5月Secrecy：No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationSupressionofSwineInfluenzaVirusProliferationinvitroofPolygeneGeneticallyModifiedPorcineM.S.Candidate：ZangFengxiaSupervisor：AssociateProf.MengQingwenDegr

6、ee：MasterofAgriculturalExtensionSpecialty：VeterinarymicrobiologyandmolecularbiologyApril2015摘要猪流感（Swineinfluenza，SI）是由猪流感病毒（Swineinfluenzavirus，SIV）引起的一种急性、高度接触性的群发性呼吸道传染病，能够造成猪群免疫抑制，给养猪业带来重大危害，同时会给人类健康构成威胁，具有重要的公共卫生意义。RNA干扰(RNAinierference，RNAi)是在进化过程中高度保守、由双链RNA（d

7、ouble-strandedRNA，dsRNA）诱发的高效特异性地降解同源mRNA的现象，能特异抑制病毒基因的表达；Mx蛋白是I型(α/β)和III型(λ)干扰素(IFN)诱导产生的细胞自身天然抗病毒活性的关键效应分子，是一种广谱的抗病毒蛋白。现代养猪生产，生产性状与抗性性状之间存在一定程度的遗传拮抗，单纯追求高产目标通常导致猪抵抗力降低；通过转基因技术改造猪的遗传性状，提高机体免疫力，可能是控制传染性疾病的有效手段。本实验室前期筛选出RNAi、Mx和4shRNA三个基因，并在细胞水平或小鼠体内或者静脉猪体内证实证明三个基因具

8、有抗病价值。在此基础上本研究探索将这三个基因联合构建到慢病毒载体中，包装慢病毒后感染猪胎儿成纤维细胞制备核供体细胞，通过体细胞核移植技术成功获得F0代克隆猪。运用分子生物学方法PCR、Southernblot、RT-PCR、Westernblot分别在DNA、RNA、蛋白质水