地克珠利对柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶特性的影响研究

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1、级：论文编号:中囯农业科学院学位论文地克珠利对柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶特性的影响研究TheEffectofDiclazurilontheCharacterizationofLactateDehydrogenaseofEimeriatenella硕士研究生：李莎指导教师：黄兵研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果=尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰

2、写过的研宄成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：糾r年/月+曰关于论文使用授权的声明木人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，si]:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被杳阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年6月今H导师签名:

3、时间：>^/」~年6月V曰中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目地克珠利对柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶特性的影响研究论文作者李莎专业领域兽医研究方向不区分研究方向指导教师黄兵培养单位(研究所、中心）爾/^r姓名职称单位专业盲评//评'I阅盲评////人盲评////—答辩程训佳教授复互大学预防兽医学主/席朱建国教授上海交通大学预防兽医学林矫矫研究员上海兽医研究所预防兽医学i答傅志强研究员上海兽医研究所预防兽医学辩金亚美研究员上海兽医研究所预防兽医学4%,、委员会议记录（秘书）顾惠明论文答辩时间地点201

4、5年5月27日，上海兽医研究所密级:论文编号:中国农业科学院学位论文地克珠利对柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶特性的影响研究TheEffectofDiclazurilontheCharacterizationofLactateDehydrogenaseofEimeriatenella硕士研究生：李莎指导教师：黄兵研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：上海兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationTheE

5、ffectofDiclazurilontheCharacterizationofLactateDehydrogenaseofEimeriatenellaM.S.Candidate：ShaLiSupervisor：Prof.BingHuangDegree：MasterofVeterinaryScienceSpecialty:VeterinaryMedicineMay2015摘要柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella,Et）是隶属于顶器复合门（Apicomplexa）艾美耳属的一种胞内寄生性原虫，可引起鸡急性盲肠球虫

6、病，严重时可致鸡只死亡。目前球虫病的控制主要依赖抗球虫药物预防。地克珠利是一种三嗪类化合物，具有高效、低毒、广谱的抗球虫效力，但若长期使用或使用不当，会出现耐药性。要防止或延缓耐药性的发生，以及研制新的有效药物，就必须了解该药抗寄生虫的分子作用机制，确定其靶标分子。至今，关于地克珠利抗球虫的分子作用机制还不清楚。乳酸脱氢酶（Lactatedehydrogenase，LDH）是糖酵解途径的末端酶，能够催化丙酮酸与乳酸之间可逆的氧化还原反应，大多数体内寄生虫依靠此途径获取能量维持生存。研究表明，E.tenella地克珠利敏

7、感株LDH（sEtLDH）与耐药株LDH（rEtLDH）的同工酶谱存在明显差异，提示EtLDH与地克珠利抗球虫作用机理存在一定联系。本研究通过sEtLDH与rEtLDH特性的差异比较、地克珠利对E.tenella孢子生殖及裂殖生殖过程中LDH的影响研究，为揭示地克珠利的分子作用机理及寻找潜在的药物靶标奠定了重要基础。1.EtLDH单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用用大肠杆菌表达的重组EtLDH可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠，经5次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合，用间接ELISA法筛选阳性

8、杂交瘤细胞，经3次亚克隆后获得2株能稳定分泌EtLDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7和2H4，抗体亚类鉴定均为IgG1，腹水效价分别为1:8000和1:64000。Westernblot检测显示2F7单抗能识别E.tenella第二代裂殖子中大小约为35KDa的天然蛋白，利用该单抗对EtLDH在E.tenella第二代裂殖子中的分