噬菌体与对虾急性肝胰腺坏死病（ahpnd）相关性研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M120150338上海海洋大学硕士学位论文噬菌体与对虾急性肝胰腺坏死病题目：（AHPND）相关性研究Studiesontherelationshipswith英文题目：phagesandacutehepatopancreaticnecrosisdisease(AHPND)专业：渔业研究方向：微生物与疾病控制姓名：王娜指导教师：黄倢研究员二O一五年五月二十七日——谨以此文献给我的导师，家人和朋友上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确

2、注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期

3、：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会人员名单姓名工作单位职称是否硕士导师备注相建海中科院海洋所研究员是主席孙黎中科院海洋所研究员是委员战文斌中国海洋大学教授是委员张士璀中国海洋大学教授是委员张晓华中国海洋大学教授是委员李晨黄海水产研究所工程师否秘书2015年6月4日上午答辩日期答辩地点黄海所1号楼3楼会议室9:00噬菌体与对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)相关性研究学位论文完成时间：__________________指导教师签字：__________________答辩委员会签字：_________________________________________

4、_____________________________________________________________________________________噬菌体与对虾急性肝胰腺坏死病(AHPND)相关性研究摘要随着水产养殖业的迅猛发展，水产养殖类动物疾病不断出现，造成了该产业巨大的经济损失。对虾急性肝胰腺坏死病（AHPND）是近年来出现的，一个困扰对虾养殖业的重要疾病，一直到目前为止，我们还没有完全明确急性肝胰腺坏死病的致病机制。该病在2013年由美国亚利桑那大学的Tran等人，首次确认并分离到了引起AHPND的病原，至此，引起AHPND的病原已经被研究者们确认。本

5、实验室自AHPND发现以来，就开始了对该病的探究，本文主要是针对AHPND相关副溶血弧菌噬菌体展开的相关探究工作。本实验室从养殖场取的患病凡纳滨对虾样品中，分离并鉴定出了5株副溶血弧菌，并通过使用Flegel和Lo公布的AHPND相关质粒检测引物，进行PCR检测，明确了这5株副溶血弧菌应均为AHPND病原菌。丝裂霉素C可用于诱导溶源噬菌体的分离。本文通过使用不同浓度丝裂霉素C对5株AHPND致病性副溶血弧菌进行敏感性测试，经过比较确认0.5μg/ml为适宜的使用浓度。通过浓度为0.5μg/ml的丝裂霉素C进行诱导，从5株AHPND相关副溶血弧菌中筛选出有2株副溶血弧菌(编号分别为2

6、0130629002S01和20130726001S01)的生长曲线表现出溶源性噬菌体进入烈解周期的趋势，提示可能存在有溶I源噬菌体。本文通过超离心的方法，对诱导释放的溶源性噬菌体进行收集，并在透射电镜下观察，证明上述两株副溶血弧菌的噬菌体提取物中的确存在噬菌体，但这两株副溶血弧菌中的噬菌体形态和大小完全不同，属于两种不同的噬菌体，形态上来看，phage1类似Wang等的描述，可能属于肌尾病毒科；而phage2可能属于盖病毒科盖噬菌体属，具体种属有待进一步验证。该结果表明所分离的噬菌体可能与副溶血弧菌的AHPND致病性无关。用卤虫无节幼体，对5株含有AHPND相关质粒的副溶血弧菌进

7、行致病力测试，测试结果表明，两株含有溶源性噬菌体的副溶血弧菌具有一定的致病力，但最高致病力的副溶血弧菌并不含有溶源性噬菌体。因此，卤虫致病力的强弱与AHPND相关的质粒有关联，而与溶源性噬菌体的有无无关，表明噬菌体的存在也不能增加副溶血弧菌的致病力。结合本实验室王海亮从副溶血弧菌毒力株中分离到疑似毒力蛋白VPP19，并根据编码基因建立了AHPND检测方法(另文发表)，此外，Sirikharin等从副溶血弧菌毒力株中分离到了可疑的细菌毒素，并建立了AHPND细菌的PCR