去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床研究

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1、Ｉ君州ＩＳＯＯＣＨＯＷＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ博±专业学位论文Ｉ论文题目去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床硏究研究生姓名高鹏指导教师姓名单玉喜专业名祿泌巧外科学研究方向泌尿外科肿瘤论文提交日期２０１５年９月Ｉ苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经ｉ表或撰写过的研究成果

2、，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名之：日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国巧：科院文献信息情报中也、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社）、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社

3、送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文〇本学位论文属在年＿＿月解密后适用本规定。非涉密论文□论文作者签名：日期；？之〇？导师签名：曰親又如ＭＩ去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床研究中文摘要去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床研究中文摘要目的：研究去势抵抗性前列腺癌伴骨转移（metastaticcastr

4、ationresistantprostatecancermCRPC)患者自体外周血自然杀伤（naturalkiller,NK）细胞经体外大规模扩增后的生物学特性，初步评估体内自然杀伤细胞治疗mCRPC的安全性及有效性。方法：（1）选择2013年1月-2014年6月来我院接受治疗的去势抵抗性前列腺癌伴骨转移患者8例，完成患者的术前相关检查：外周血常规、肝肾功能、前列腺特异性抗原（prostate-specificantigenPSA），淋巴细胞亚群、血清中细胞因子；临床影像学评估（胸片、B超、X-CT、磁共振、

5、骨扫描）；采用Kamofsky评分评估患者生活质量；数字疼痛强度量表（NumericalratingscaleNRS）对每位患者的疼痛进行疼痛评分。抽取患者外周血，每次50ml，共3-4次。（2）Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞（PeripheralbloodmononuclearcellsPBMC），NK包被培养瓶为T75培养瓶，接种细胞用；培养到50ml体积，变黄时由一个T75培养瓶扩增到两个T75培养瓶，变黄时转移到培养袋继续培养。后续补液只需要加GT-T551+1000IUIL-2+10

6、％自体血清。自体血清用完后，加自体血浆，全部用完后可以不加。CD137L(5ug/ml)因子包被培养瓶用；γ干扰素（1000U/ml）d0天加入，1000×,IL-15(2ug/L)补充到GT-T551，IL-1β（1000U/ml）、IL-7（1000U/ml）、IL-12（1000U/ml）、IL-18（1000U/ml）、IL-21（1000U/ml）因子在d1天加入。（3）对体外培养扩增的NK细胞进行显微镜观察细胞生长情况、流式细胞仪检测NK细胞的纯度，采用Calcein-AM分析NK细胞对前列腺癌细

7、胞系PC-3的杀伤能力，体外鉴定NK细胞是否具有治疗前列腺癌的潜能。细胞回输之前经过无菌、内毒素、支原体等质量检验。（4）所有患者均接受自体自然杀伤细胞输注治疗，其中4例患者接受3次输注I中文摘要去势抵抗性前列腺癌伴骨转移自然杀伤细胞治疗的初步临床研究治疗，剩下4例患者接受4次输注治疗，完成前列腺癌患者NK细胞输注术后相关检查，对前列腺癌患者细胞输注术后的生活质量及疼痛再次进行评分，判断NK细胞对mCRPC治疗的安全性和有效性。结果：（1）从抽取的50ml外周血中分离出NK细胞，进行体外培养扩增，NK细胞9-

8、+可以达到1000倍左右的扩增效率，总细胞数量平均达到4.39×10，CD3CD16/56NK细胞的纯度平均达到84.3%。（2）体外扩增的NK细胞对PC-3及K562具有明显的杀伤作用，在效靶比10:1时，对PC-3及K562的杀伤作用分别为78%和82%。（3）NK细胞回输完成后第三天检测，8例患者当中有5例患者出现前列腺特异性抗原（prostate-specificantigen,PSA）的下