保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究

《保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI全日制硕士专业学位（毕业）论文保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究学位申请人：蔡小波指导教师：郑世学教授学位名称：兽医硕士研究领域：授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十一日 独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河北农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：>丨《年会月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河j匕农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行袷索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字円期：年5月}曰签字曰期：年十月)曰学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编: 分类号：S857.1单位代码：10086密级：公开学号：20139140677保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究StudyontheEpidemiologicalInvestigations,DiagnosisandTreatmentofCanineMammaryTumorsinBaodingRegion学位申请人：蔡小波指导教师：郑世学教授学位名称：兽医硕士研究领域：授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年五月三十一日 摘要犬乳腺肿瘤是正常乳腺组织在各种致癌因素的长期刺激下发生的组织细胞恶性增殖而形成的实质性肿块，是犬最常见的肿瘤。随着经济的发展和人们生活水平的提高，宠物犬的养殖量不断增加，犬主人对其重视程度也与日俱增。与此同时犬乳腺肿瘤的发病量也直线上升，对宠物犬的生命健康构成严重威胁，给犬主人的生活和心理造成重大影响。本试验收集了保定地区送诊的犬乳腺肿瘤病例40例，通过相流行病学调查、一般检查、X射线检查、病理组织学观察及三种治疗方案的筛选，为保定地区犬乳腺肿瘤的临床诊断、治疗及预防提供了依据。结果表明保定地区犬乳腺肿瘤的发生与品种、年龄、生育史、既往病史、生活环境及日常饮食有密切关系。保定地区犬乳腺肿瘤临床病例恶性肿瘤占75.0%（30/40），良性肿瘤仅占25.0%（10/40），发病类型主要为恶性肌上皮细胞瘤（15.0%）、髓样癌（12.5%）、恶性混合瘤（20.0%）、管状腺癌（27.5%）、以纤维腺瘤（7.5%）和良性混合瘤（17.5%）。乳腺肿瘤发病主要中于7岁以上老龄犬，占总病例数的75.0%（30/40）。未生育的犬发病率相对较高；德国牧羊犬和北京为易发病品种，发病率分别为20.0%（8/40）和17.5%（7/40）。乳腺良性疾病、子宫蓄脓、流产及假孕等既往病史对犬乳腺肿瘤的发生有一定的诱导作用。在日常饲养方面，日粮以肉类为主的犬发病较高，在城市生活的犬易发病。犬乳腺肿瘤主要发生在尾侧腹对乳腺组织，左侧单乳区发病较高。典型乳腺肿瘤的临床症状表现为患犬乳房皮下有一个或多实质性肿块，肿块呈“菜花”状并突出体外，肿瘤血管清晰，饮食下降，体重减轻。超声断层扫描及X射线诊断能够发现隐藏的转移病灶，并能迅速对肿瘤与非肿瘤疾病进行鉴别。病理组织学观察是乳腺肿瘤最终定性和分类的重要方法。通过对单纯手术治疗组、手术后化学治疗组、手术后中药治疗组三种治疗方案进行观察筛选，结果发现化学辅助治疗组术后6个月生存率显著提高，应在兽医临床上广泛应用。结论：保定地区犬乳腺肿瘤临床病例以恶性肿瘤为主，管状腺癌发病率最高。7岁以上德国牧羊犬和北京犬为多发品种，乳腺良性疾病、子宫蓄脓、流产、假孕及肉类食谱是该病发生的危险因素。犬乳腺肿瘤主要发生在尾侧腹对乳腺组织，左侧单乳区发病较高。病理切片观察是乳腺肿瘤定性和分类的主要方法。手术切除后化学辅助治疗、中药辅助治疗均能有效提高生存率，化学辅助治疗效果最好。关键词：保定地区；犬乳腺肿瘤；流行病学调查；诊断；治疗 StudyontheEpidemiologicalInvestigations,DiagnosisandTreatmentofCanineMammaryTumorsinBaodingRegionGraduatecandidate:XiaoboCaiMajor:VeterinaryMedicineAdvisor:Prof.ShixueZhengAbstractCaninemammarytumors,asthemostcommoncancerindogs,aremalignantproliferationofcellsinnormalbreasttissuethatoccurunderlong-termstimulationofvariouscarcinogenicfactors,alsowiththeformationofasubstantialmass.Withthedevelopingoftheeconomic,people'slivingstandardsisimproving,soistheamountofpetdog,peoplepaymoreattentiontotheirdogs’healthy.Meanwhiletheincidenceofmammarytumorsindogsareskyrocketing,whichposeaseriousthreattothelifeandhealthofpetdogs,tothedogowner'slifeandpsychologicalsignificantimpactaswell.Inthisstudy,40casesofmammarytumordogswerecollectedinBaoding.Throughtherelevantfactors,clinicalexamination,X-rayexamination,histologicalobservationofpathologyandthescreeningofthreetreatmentprogramsofdogswithmammarytumors,soastoprovidereferencesforclinicaldiagnosis,treatmentandpreventionofmammarytumorsofdogsinBaoding.Theresultsshowedthattherewasacloselinkbetweenthecaninemammarytumorswithregion,breed,age,reproduction,disaeshistory,environmentandthedietaroundBaoding.Inclinic,malignantmammarytumorsaccountedfor75.0%(30/40)andbenignmammarytumorspossessedfor25.0%(10/40).Caninemammarytumorsmainlycontainmalignantmyoepithelialcelltumor(15.0%),medullarycarcinoma(12.5.0%),malignantmixedtumors(20.0%),tubularadenocarcinoma(27.5%),fibroadenoma(7.5%)andbenignmixedtumor(17.5%).Themammarytumorsmainlyappearedinthedogsover7yearsoldandwarethe75.0%ofthetotalnumberofcases.Thedogswithoutbirthhadthehighestincidence.GermanShepherdandBeijingwarevulnerabletomammarytumorswiththeincidenceof20.0%(8/40)and17.5%(7/40).GermanShepherddogandPekingeseswithoutbirthhadthehighestincidence.Benignmammarydisease,pyometra,falsepregnancyandmiscarriagecanpromotethemammarytumorigenesis.Inthedailyfeeding,dogswhosediettomeat-basedhadahigherprevalenceandthedogslivingincitiespronetothedisease.Caninemammarytumorsoccurmainlyinthebreasttissueofcaudalabdomen,ahigherincidenceoftheleftsinglemammaryarea.Thetypicalclinicalsymptomsofpetswithcaninemammarytumorshaveoneormoreofcaninemammarysubcutaneoussolidmass,themasswaswith"cauliflower"shapeandprominentinvitro, tumorvesselswasclear,dietandweightloss.UltrasoundtomographyandX-raydiagnosticmammographycanfindthehiddenmetastasesandidentifytumorandnon-tumordiseasequickly.Histologicalobservationofpathologyistheimportantmethodforcharacterizationandclassificationforcaninemammarytumors.ClinicalcasesinBaodingofcaninemammarytumorsaremainlymalignancy,tubularadenocarcinomabenignmalignantmultiple,andbenignmultiplebenignmixedtumor.Bysurgeryalone,chemotherapyaftersurgeryandmedicinetreatmentaftersurgerythsesthreetreatmentregimens,theresultsshowedthatthedogsacceptedchemotherapyaftersurgeryhadhighersurvivalrateafter6months,andthistreatmentcanbewidelyusedintheveterinaryclinic.Conclusion:ThemalignantmammarytumorsaccountedforthemostofdogswithcaninemammarytumorsandthetubularadenocarcinomawasthemostcommontypeinBaodingRegion.GermanShepherddogsandPekingesesover7yearoldhavethehighestincidenceoftheCaninemammarytumorsinBaodingRegion.Benignbreastdisease,pyometra,falsepregnancyandmiscarriageandmeat-baseddietsaretheriskfactorsofthedisease.Caninemammarytumoroccursmainlyinthecaudalabdomenofmammarytissue,ahigherincidenceofthesinglemammaryareaoftheleft.Pathologicalobservationisthefundamentalmethodofbreasttumorseventuallycharacterizationandclassification.ChemicaladjuvanttherapyaftersurgicalresectionadjuvanttherapyoftraditionalChinesemedicinecaneffectivelyimprovethesurvivalrate,andchemicaladjuvanttherapyworksbest.Keywords:BaodingRegion;caninemammarytumor;epidemiologicalinvestigation;diagnosis;treatment 缩略词缩写词英文全称中文全称HEHematoxylin-EosinStaining苏木精-伊红染色法人第10号染色体缺失的PTENPhosphataseandtensinhomologdeleted磷酸酶onchromosometenTSCTumorstemcells肿瘤干细胞EREstrogenrecepto雌激素受体GHGrowthhormone生长激素MRIMagneticResonanceImaging核磁共振成像FNACFineneedleaspirationcytology细针穿刺细胞学检查PRProgesteronereceptor孕激素受体 目录1引言............................................................................................................................11.1肿瘤发生的机制.............................................................................................11.1.1基因的突变学说..................................................................................11.1.2免疫监视学说......................................................................................21.1.3干细胞来源学说..................................................................................21.2犬的乳腺肿瘤.................................................................................................21.2.1犬乳腺肿瘤的发病因素......................................................................21.2.2犬乳腺肿瘤的临床症状......................................................................31.3犬乳腺肿瘤的诊断方法.................................................................................41.3.1一般检查..............................................................................................41.3.2超声断层扫描......................................................................................41.3.3X射线诊断..........................................................................................41.3.4核磁共振技术诊断..............................................................................51.3.5细针吸取细胞学检测..........................................................................51.3.6病理组织学观察..................................................................................61.3.7基因水平的研究..................................................................................61.4犬乳腺肿瘤的预防.........................................................................................71.5犬乳腺肿瘤的治疗方法.................................................................................71.5.1手术治疗..............................................................................................71.5.2放射线疗法..........................................................................................81.5.3激素疗法..............................................................................................81.5.4化学疗法..............................................................................................91.5.5中药治疗..............................................................................................91.6目的及意义..................................................................................................102材料与方法.............................................................................................................112.1材料..............................................................................................................112.1.1试验动物...........................................................................................112.1.2试验地点...........................................................................................112.1.3主要仪器...........................................................................................112.1.4主要药品及试剂...............................................................................112.2试验方法......................................................................................................122.2.1流行病学调查...................................................................................122.2.2一般检查...........................................................................................122.2.3X射线诊断........................................................................................12 2.2.4病理组织学观察................................................................................132.2.5治疗试验.............................................................................................143结果..........................................................................................................................163.1流行病学调查................................................................................................163.1.1犬乳腺肿瘤发生与年龄的关系.........................................................163.1.2犬乳腺肿瘤发生与品种的关系.........................................................173.1.3犬乳腺肿瘤发生与发病部位之间的关系.........................................183.1.4犬乳腺肿瘤的发生与既往病史的关系.............................................203.1.5犬乳腺肿瘤与生育史的关系.............................................................213.1.6犬乳腺肿瘤的发生与日常饮食的关系.............................................213.1.7犬乳腺肿瘤的发生与生活环境的关系.............................................223.1.8犬乳腺肿瘤的发生与肿瘤性质的关系.............................................233.2乳腺肿瘤患犬的临床症状............................................................................233.3X光诊断........................................................................................................253.4病理组织学观察............................................................................................283.5治疗效果........................................................................................................324讨论...........................................................................................................................334.1犬乳腺肿瘤的发生与各因素的关系............................................................334.1.1犬乳腺肿瘤发生与年龄的关系.........................................................334.1.2乳腺肿瘤发生与品种的关系.............................................................334.1.3犬乳腺肿瘤发生与发病部位之间的关系.........................................334.1.4犬乳腺肿瘤的发生与生活环境的关系.............................................344.1.5犬乳腺肿瘤的发生与既往病史的关系.............................................344.1.6犬乳腺肿瘤与生育史的关系.............................................................354.1.7犬乳腺肿瘤的发生与日常饮食的关系.............................................354.1.8犬乳腺肿瘤的发生与肿瘤性质的关系.............................................364.2犬乳腺肿瘤临床诊断情况............................................................................364.3犬乳腺肿瘤治疗方法比较............................................................................365结论...........................................................................................................................39参考文献....................................................................................................................40作者简历....................................................................................................................45致谢............................................................................................................................45 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究1引言肿瘤是动物机体在不同时期各种致癌因素共同刺激作用下，正常组织细胞内基因发生变异，对自身生长、增殖活动失去正常的调节能力，以致过度分裂增殖而形成的肿块。恶性增殖的肿瘤组织打破原有的生长代谢规律而变得不受约束和控制，不会程序性衰老和凋亡，呈现出无序、无限制的恶性增殖，导致组织细胞形态异常、功能和[1]代谢紊乱以致损坏组织器官正常的结构和功能。肿瘤主要分为良性肿瘤和恶性肿瘤两种基本类型，恶性肿瘤又称为癌症。良性肿瘤主要是膨胀性或外生性生长，常形成完整的包膜，与周围正常组织有明显的界限；肿瘤细胞不断分裂增殖，犹如正在充气的气球，排挤、压迫周围组织，但没有侵袭性；生长缓慢，很少有坏死和出血现象；组织分化好，异型性小，与周围组织形态相似，病理核分裂相较少；没有转移和扩散现象，肿瘤切除后不易复发。恶性肿瘤多为浸润性生长，肿瘤生长速度快；无包膜，分化程度低，与原发组织细胞形态差异较大；具有侵袭性与邻近正常组织紧密相接。瘤细胞分裂增生侵入周围组织间隙、血管或淋巴管内，像树根一样侵袭破坏周围组织，核分裂及异形现象比较常见。触诊时肿瘤游走性差，手术不易根除，容易复发和转移。肿瘤对机体的影响主要靠压迫、侵蚀、分泌有害物质。肿瘤细胞增殖产生的异常的酶、蛋白质、代谢产物及组织器官崩解产物，会导致机体出现梗塞、破溃、出血、内分泌失常、贫血等症状并引起局部感染，以致出现全身系统性各脏器功能衰竭直至死亡。正常组织细胞癌变形成肿瘤细胞后排列散乱、大小不一，失去正常的生理功能，细胞间连接不紧密，容易游离到血液或淋巴液并随之向全身扩散形成最初的转移病灶，给肿瘤的诊断、诊治及预后造成巨大影响。1.1肿瘤发生的机制1.1.1基因突变学说针对肿瘤发生原因的研究非常广泛，基因突变学说一直占据其发病机制的主导地[2]位。该学说认为肿瘤的发生是由原癌基因（Proto-oncogene）或抑癌基因（Tumorsuppressorgene）的突变和异常表达引起的。原癌基因是生物体基因组的正常组成成分，通过编码一系列蛋白产物而调节细胞的增殖、分裂和分化过程，当其处于基因组正常位置或未被激活时并不诱发肿瘤。在各种致癌因素刺激作用下，可引起原癌基因的重排、扩增或突变而被激活，从而使其表达增强，编码过多或异常的蛋白质，促进[3]肿瘤的发生。抑癌基因是正常基因组内具有维持细胞增殖生长和抑制细胞转化作用[4]的基因，又称隐性癌基因或肿瘤抑制基因。当受到各种致癌因素的刺激肿瘤抑制基因功能丧失，失去了对细胞生长的控制并引起细胞癌变。多种原癌基因或抑癌基因异[5]常表达，协同发挥作用使细胞不受控制的持续分裂增殖，迅速聚集形成肿瘤。近期有研究证实大多数肿瘤的发生都伴随着P53蛋白的过量合成或c-erbB-2基因的异常表1 全日制硕士专业学位（毕业）论文[6]达。美国与瑞典科研工作者经过长期的合作研究证实，敲除肿瘤抑制基因PTEN后，[7]乳腺癌1号基因（BRCA1）会发生突变并引发癌症。1.1.2免疫监视学说免疫监视学说建立在基因突变学的基础上，该学说认为生物体内细胞增殖分化的过程中经常发生基因突变，细胞发生基因突变后会被体内的免疫系统识别并被视为异己细胞，迅速被清除消灭在萌芽状态。现以证明无论物理因素、生物因素、化学制剂或其它致癌因素引起的肿瘤，在肿瘤细胞表面都存在肿瘤特异性抗原，机体对肿瘤细[8]胞的免疫以细胞免疫为主。当年老体衰或其它原因导致机体的免疫机能受到抑制或免疫监视能力降低时，体内可产生一些特殊的保护肿瘤的细胞因子，使机体对肿瘤细胞失去识别能力和抑制作用，不能及时有效的发现和清除突变细胞，从而导致肿瘤的[9]发生。此外，由于肿瘤抗原的抗原性很弱，且可随肿瘤的不断增长而持续释放，结果使机体对这种连续性的弱刺激出现免疫耐受性，从而成为肿瘤细胞在体内生长发展的重要条件。1.1.3干细胞来源学说干细胞来源学说认为肿瘤来自小部分干细胞的异常分裂增殖，而不是分化成熟的[10]组织细胞逆分化重新具备了分裂能力，因为肿瘤细胞与干细胞存在许多相同之处：都能无限增殖；都存在相似信号传导途径；都具有端粒酶活性；都能向不同的组织转移并大量增殖；有相似的归巢和转移途径。由于干细胞分裂增殖较快，在其正常分裂时，DNA的复制会发生经常性的错误，如基因缺失、损伤或突变。一般情况下，由于机体有一套完善的DNA损伤修复系统，这种错误能够被及时发现并触发细胞凋亡程序而被清除。在各种致病因素的刺激下DNA损伤的细胞未被及时发现和清除并继续参与增殖分化，随着分裂次数的增加，这种错误可在DNA链中累积，达到一定程度可能导致原癌基因或者抑癌基因的激发或突变而异常表达，致使细胞转入无限制的[11]恶性增殖并形成肿瘤。目前干细胞来源学说仍存在两种观点：一种认为肿瘤细胞全都是具有增殖能力的干细胞；另一种观点认为肿瘤组织中只有很少一部分细胞是具有干细胞性质的癌细胞亚群，它具有增殖和分化的能力，称为肿瘤干细胞（Tumorstemcells,TSC），是肿瘤不断增长、分化及扩散的根源。1.2犬的乳腺肿瘤1.2.1犬乳腺肿瘤的发病因素乳腺肿瘤是犬最常见的肿瘤，在犬各种肿瘤疾病中发病率高达30%以上，其发生、发展受到内外各种刺激因素共同作用的影响。内在因素主要包括遗传因素、年龄因素、2 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究性别因素、激素因素、种属品系及机体的免疫状态，外在因素包括周围环境中各种生物因素（病毒、霉菌、寄生虫等）、化学因素（亚硝胺、氨基偶氮化合物等）及物理[12]因素（X射线、放射性元素、热辐射、电离辐射等）。肿瘤的发生受到遗传因素的影响已经证实，1976年Lynch提出“肿瘤易患性”和“抗癌性”的概念：广泛的遗传流行病学调查显示多种肿瘤具有明显的家族聚集现象，肿瘤的遗传并不是肿瘤本身的遗传，遗传的是对肿瘤的易感性（倾向性），在此基础上需要有其它的外在致癌因素的刺激才能发生肿瘤。动物种属、品种与品系不同，肿瘤的发生情况和肿瘤的类型也有显著差异，乳腺肿瘤是母犬最常见的肿瘤，在各类肿瘤疾病中发病率最高。乳腺[13]肿瘤在各品种犬中均可能发生，品种不同乳腺肿瘤发病率有很大差异。现代肿瘤理论普遍认为肿瘤多发于老龄动物，一方面是因为肿瘤的形成是不同的致癌因子在不同时期长期发挥作用共同影响的结果，这些作用的发挥需要一个较长的时间，或者说这些因子刺激作用开始的时间到形成临床可见肿瘤有一段较长的间隔时间；另一方面，老龄动物机体免疫力下降，对突变细胞监控能力减弱，这也是肿瘤常见于老龄动物的一个重要原因。调查发现犬乳腺肿瘤的发生与犬年龄的大小有一定的联系，8-13岁发病较多，年龄越大发病率越高。饮食习惯对各种疾病的发生和预防均有一定的作用，既能致病又能防病。肿瘤的发生是多因素综合影响的结果，饮食习惯及生活环境通过物理、化学作用长期刺激机体，对乳腺肿瘤的发生、发展具有一定的影响，据专家估[14]计饮食因素占乳腺肿瘤发病原因的35%，50%的肿瘤与饮食有关。大多数乳腺肿瘤是特定激素的靶器官，肿瘤组织中具有特异性的激素受体，全部乳腺肿瘤病例的50%[15]以上具有依赖激素的特性。研究表明乳腺肿瘤患病个体内分泌紊乱，雌激素长期保持较高水平，雌激素通过雌激素受体（Estrogenreceptor,ER）调节孕激素受体（Progesteronereceptor,PR）的表达，促进乳腺导管上皮细胞过度增、导管扩张，刺激靶ER分泌量增加、活性越强，肿瘤分化程度越高；另外由孕激素诱导的生长激素（Growthhormone,GH）在乳腺组织中过量分泌也可刺激乳腺导管上皮细胞过度增生，促进乳腺肿瘤的形成。有研究发现抑制雌激素过度分泌或竞争性结合雌激素受体，阻断雌激素对靶器官的刺激，可有效地改善乳腺肿瘤患者术后生存质量，延缓肿瘤复[16]发。1.2.2犬乳腺肿瘤的临床症状乳腺肿瘤患犬腹部或胸部乳腺组织有一个或多个肿瘤，肿瘤或者独立存在或者连成一片，由于从发现病变到送诊间隔的时间不同，肿瘤的大小不一，最大直径从1.5cm-18cm，重量30g-2500g，数量从单个发病到遍及多处乳腺组织。肿瘤发展程度差异也很大，送诊较早的病犬，主要为良性肿瘤，一般较小，病灶单一，呈圆形或椭圆形，无热无痛，运动及精神状态并无明显影响；肿瘤与周围组织分界清晰，游离性强，一般可推动。送诊较晚的病犬，肿瘤较大且多为恶性肿瘤，肿瘤形态不规则，呈“菜花”状或凹凸不平、触诊较硬；多呈浸润性生长，与周围组织紧密相连，界限3 全日制硕士专业学位（毕业）论文不清，游离性差；后期肿瘤表面可能发生溃破、充血、静脉怒张以及局部温度升高等情况，常伴有炎症、贫血、消瘦、饮食下降及精神萎靡等全身症状。1.3犬乳腺肿瘤的诊断方法1.3.1一般检查一般检查是犬乳腺肿瘤临床诊断中的重要组成部分，通过对动物主人的询问及一般诊断可以对患病犬精神状态、体质、病情发展及饲养管理做出初步了解和判断。检查时围绕发病部位及异常功能状态进行重点观察和诊断并进行整体的系统性检查。乳腺肿瘤属于表浅肿瘤，比较容易被发现，通过一般检查初步判断是乳腺肿瘤或是其它非肿瘤病变（如增生、炎症、脓肿等）引起的肿块。妊娠期、发情期或哺乳期的母犬雌激素水平较高，乳腺肿胀、增生形成肿块的情况比较常见，这些肿块会随着激素水平的降低而缩小，要特别注意鉴别诊断。注意检查肿瘤整体状态及周边乳腺组织，尤其注意肿瘤的大小、形态、硬度、游离性及瘤体表面血管、溃疡等病症。整体检查主要诊断心肺功能是否异常，是否有明显的转移扩散情况以及整体功能状态。结合全面检查和局部检查初步判断肿瘤的性质和发展状况，为进一步诊断和治疗提供参考依据。1.3.2超声断层扫描超声断层扫描在医学上广泛用作乳腺X射线诊断的辅助检测技术，作为一种非侵害性诊断技术具有独特的优势。超声断层扫描可以直观地实时显现探查部位的切面图像并清楚地显示病变及相邻组织、器官的特征。通过灰度变化超声断层扫描可以准确地反映深层肿瘤的形态、位置及病变范围，广泛用于可疑病灶的探查及小型瘤状物[17]的诊断。有研究表明良性与恶性肿瘤的超声图像表现特征有明显的差异，因而可用[18]于肿瘤是否恶变的术前诊断。犬乳腺肿瘤多为皮下肿瘤，突出体外，肉眼容易发现，超声扫描主要应用于潜在的，疑似发生转移的病犬进行腹腔或胸腔探查。超声扫描图像表明良性肿瘤呈球形或卵圆形而且边缘规则，肿瘤内部回声为均质的。恶性肿瘤边缘不规则多呈“毛刺”状且明显向周围组织侵袭，结构区域分界不明显，肿瘤的内部显示为非匀质回声。1.3.3X射线诊断X射线诊断是目前临床上乳腺肿瘤检测准确率最高的无创性检测手段，具有很高[19]的分辨率和可重复性。通过对患犬的乳腺X射线摄像，乳腺肿瘤一般能清晰的表现在X光片上，并可以通过肿瘤的高密度摄影对其恶性程度进行判断。乳腺组织结构复杂、密度相似，X射线对乳腺组织有更强的分辨率，能够对乳腺正常组织与微小4 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究[20]病灶进行有效区分，具有独特的优越性，目前乳腺肿块X射线诊断准确性已达83%。乳腺肿瘤在X光片上的主要表现特征有钙化造影、局部结构弯曲及致密性团块。一般认为肿瘤细胞活动或坏死导致钙盐沉积形成钙化，钙化灶的大小及数目与肿瘤恶性程度密切相关。恶性乳腺肿瘤X光片表现为钙化颗粒较多，呈砂砾状或不规则斑点，[21,22]良性肿瘤表现为10粒以下中空环状钙化灶。X射线能对乳腺肿瘤的范围大小及与周围组织的联系有更准确的判断，用于判断乳腺肿瘤恶性程度及疑似肿瘤的定性检查，也可以发现临床上肉眼未见的肿瘤及扩散转移的病灶。X射线对较小钙化现象的病例非常敏感，对其空间分辨和密度分辨率非常清晰，但对于微小的病变难以区分是乳腺肿瘤还是其它乳腺增生性疾病。另外此检测方法辐射性较强，不适宜怀孕动物的检查。1.3.4核磁共振技术诊断核磁共振技术（MRI）主要是采用表面线圈及专用的成像序列，具有很高的组织分辨率，对动物的软组织结构进行诊断能够对各种脏器的冠状面、矢状面及斜位断层[23]有多方位成像。此检测方法无创伤性、无辐射，对乳腺肿瘤及其它乳腺疾病的诊断有重要意义。尤其是造影剂的使用，可以清楚地显示病灶的血液供应情况，为兽医临床诊断提供了更多的有用信息。乳腺核磁共振的应用指征（RankinSC2000）为：乳腺肿瘤的术前分期鉴定；在对乳腺肿瘤保乳手术进行术后鉴别；在肿瘤切除术后对肿瘤残余情况的评价；在发展期的恶性乳腺肿瘤治疗过程中，对其化疗效果进行评价；出现在腋窝的转移性淋巴结，但在临床上和用X线检查时均为阴性的可疑病例；对X射线或者超声断层扫描结果存在疑问病例者。1.3.5细针吸取细胞学检测细针吸取细胞学（FNAC）是诊断乳腺肿瘤的重要手段，利用瘤细胞形态的改变和胞核不稳定的特点，从乳腺分泌物或肿块穿刺抽吸物中检测瘤细胞。该方法安全快[24]捷、操作简便、费用低、可信度高，可疑肿瘤病例诊断准确率高达90%以上。恶性细胞的存在是肿瘤或癌症发生的标志，且肿瘤细胞粘附性低，容易脱落，一般能在患犬乳头分泌液及主要脏器的异常分泌物中检测出来。肿瘤细胞与正常组织细胞有明显的区别，肿瘤细胞巨核现象比较突出，核质比高于正常水平，并可能出现巨双核或多核的现象。核内染色体数目增加或缺失，多呈非整倍态，通过HE染色、丫啶橙（AO）[25]荧光分染或抗单链DNA抗体能够对脱落的肿瘤细胞进行鉴别。FNAC诊断在肿瘤普查及康复监测中可以发现病变，兽医临床上可以对疑似肿瘤的乳腺肿块进行细胞病理学检测具有一定指导意义。细胞学检查取材量少，涂片中仅有细胞，无法观察肿瘤组织结构的全面特征及其与周围健康组织的关系，其可靠性不及病理组织学诊断。5 全日制硕士专业学位（毕业）论文1.3.6病理组织学观察将病变部位取出的小块组织或手术切除的病灶制成病理切片，观察组织细胞的形[26]态及结构的变化，以确定病变的性质并作出病理学诊断，称为病理组织学观察。病理组织切片检查是判断其他各种诊断方法是否正确的最终决定性诊断方法，不仅能判[27]断肿瘤与非肿瘤，还可以分辨肿瘤细胞的组织来源、原发瘤及转移瘤。肿瘤的组织来源与其恶性程度密切相关，通过病理组织分析，可以对肿瘤组织的类型、组织学分级（肿瘤细胞在显微镜下的形态及与正常组织细胞的相似和不同之处）、肿瘤的大小和肿瘤的分期（包括局部或远处的转移）等详细情况进行分类。目前，在对乳腺肿瘤进行分类时，仅根据穿刺液对肿瘤实施分类的方法是不充分的，兽医临床上对犬实施乳腺肿瘤切除术后，最好能够结合病理组织诊断结果对乳腺肿瘤定性并指导后续治疗。1.3.7基因水平的研究在基因水平上，针对于乳腺肿瘤的发生、侵袭和转移与基因表达关系的研究主要[28]集中在P53、PTEN、c-erbB-2等基因上。P53基因是最重要的肿瘤抑制基因，所编[29]码的核内磷酸化蛋白分子质量为530000，称P53蛋白。P53基因作为一种肿瘤抑制基因对维持基因组的稳定有重要意义，一半以上带瘤生存的患者存在P53基因的变异。P53基因有存在野生型和突变型两种形式。野生型存在于正常细胞中，其编码的蛋白质抑制制细胞过度分裂增殖，引起细胞周期阻滞，抑制血管形成，诱导细胞程序性死亡及促进细胞分化，从而防止肿瘤的发生。细胞增殖过程中DNA复制时出现错误或损伤时P53基因被活化，P53蛋白诱导下游靶基因表达并与之结合，抑制细胞生[30]长并启动进行DNA修复程序。在体内外各种致病因素的刺激下，P53基因发生缺失或突变成为P53突变体，其编码的蛋白质失去对细胞周期的调控能力，允许DNA突变细胞进入细胞周期继续进行细胞增殖，使细胞周期失去调节并具有抗凋亡作用，[31]引起细胞恶性增殖及肿瘤的发生。研究发现恶性乳腺肿瘤患者P53阳性表达率较[32-34]高，容易发生转移和复发。现已证实P53蛋白的表达与乳腺肿瘤恶性程度密切相关，其阳性率的高低是判断患病犬预后的重要指标，其阳性率越高肿瘤恶性程度越高，[35,36]治疗效果越差。PTEN基因是一种肿瘤抑制基因，该基因的突变是多种肿瘤发生[37]的重要环节。研究发现PTEN基因可以调控磷酸酯酶的合成，磷酸酯酶为一种肿瘤抑制因子在机体内广泛存在，通过调控细胞分裂周期、诱导细胞凋亡、抑制血管生成[38]的方式抑制细胞过度增殖和肿瘤的发生。该基因所编码的脂质磷酸酶的活性及含量对调控细胞凋亡发挥重要的作用，其作用机制可能有以下两种：使快速分裂的细胞阻滞在G1期同时刺激细胞分化，诱导细胞凋亡；PTEN可使PIP3处于较低水平，可阻断PI3K的AKT通路，进而诱导细胞凋亡及细胞周期的阻滞。研究发现50%以上的乳腺肿瘤患者有明显的PTEN基因的突变、丢失或启动子的甲基化的现象，表明PTEN的表达异常与乳腺肿瘤的分化、转移有关。Varghese等研究证实恶性乳腺肿瘤患者6 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究[39]PTEN基因处于变异状态，PTEN异常表达是乳腺肿瘤的发生和发展的重要环节。[40]郭卫东等发现PTEN阳性表达率高的乳腺肿瘤患者，肿瘤不易发生扩散和转移。邱昌伟等认为PTEN蛋白在恶性乳腺肿瘤组织中表达较低，并且与淋巴结转移及组织学[41]分级密切相关，可作为乳腺肿瘤病理分类的重要标志物。c-erbB-2是一种编码1855KD跨膜蛋白（P185）的细胞来源的癌基因，正常情况下处于非激活状态（又称原癌基因），参与细胞生长、分化的调节，在各种致病因素刺激下突变活化，具有肿瘤转化活性。研究发现c-erbB-2基因在肺癌、乳腺癌、肝癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤中均有异常表达，对于原癌基因c-erbB-2变异及蛋白P185异常表达与肿瘤病理关系的探索主要集中于乳腺肿瘤，并将P185蛋白的阳性表达率作为判断乳腺肿瘤预后的[42]重要标志物。詹镕洲等发现c-ebrB-2在乳腺肿瘤的表达多见于单纯癌、导管内癌、浸润性小叶癌及浸润性导管癌而且与淋巴结转移有关，对区分恶性与良乳腺肿瘤及预[43]后判断有重要意义。李向东在c-erbB-2表达与乳腺癌预后相关性的研究中发现，[44]c-erbB-2蛋白的阳性表达越高ER、PR水平越低，预后结果越差。Tauchi发现3例c-ebrB-2阳性病例，虽然肿瘤最大直径小于3cm，却已出现淋巴结转移，由此判断提[45]示c-ebrB-2的表达可能与早期淋巴结转移有关。1.4犬乳腺肿瘤的预防犬的乳腺肿瘤是在内外多种致癌因素在不同时期长期作用的结果，其发病机理及决定因素尚不明确，目前没有有效的手段可以明确的预防乳腺肿瘤的发生。兽医临床上犬乳腺肿瘤的预防主要是在早期对母犬实施卵巢子宫切除术（绝育术），减少激素对乳腺组织的不良刺激，对于预防乳腺肿瘤及激素靶器官系统性疾病有重要的作用和意义。研究显示，母犬乳腺肿瘤高发的可能性为25%-50%，而2.5岁之前对犬实施卵巢子宫摘除术，会使其发病的危险性得到降低，时间越早效果越明显。可见犬早期绝育对预防乳腺肿瘤的发生有重要意义，因而非繁殖用母犬尽早实卵巢子宫切除术是降低这种危险性的主要技术措施。另外远离各种物理、化学及生物性肿瘤诱发因素，保持良好的饲养管理和饲喂方式，对各类疾病及时诊断和治疗，减少各种不良刺激都能对乳腺肿瘤的发生起到一定的预防作用。1.5犬乳腺肿瘤的治疗方法1.5.1手术治疗对于犬乳腺肿瘤的治疗，兽医临床上还没有统一方案和指导方针，手术切除是被普遍认可并广泛采用的治疗方式。根据肿瘤大小、位置和发展程度采取不同的手术方式，主要包括单纯肿瘤摘除术、区域性乳腺切除术、单侧乳腺切除术和全部乳腺切除术。单纯肿瘤摘除术仅切除肿瘤病变或其所在的单个乳腺组织，适于较小的肿瘤。区域乳腺摘除术，同时切除肿瘤病灶所在乳腺及相邻或相关联的乳腺组织，适于肿瘤与7 全日制硕士专业学位（毕业）论文深层乳腺组织粘连不易分离的病变。单侧乳腺摘除，切除患病部位同侧所有乳腺组织，仅保留对侧健康组织。两侧乳腺摘除术，摘除所有乳腺组织，适用于弥漫性肿瘤或多发性病灶，这类病例病变不集中所有乳腺组织都可能有潜在的病灶。手术切除术可以快速有效地清除病变，治愈未扩散、非侵袭性、分化良好的良腺肿瘤，但对于老年和体弱的个体手术危险性大。对于病理组织学分级较高、瘤体较大的、可能发生扩散、转移的犬恶性乳腺肿瘤，在手术切除术并不能根除微小转移病灶，在此基础上可以通过其它的一些辅助疗法对潜在或转移的微小病灶进行控制，以延长存活时间，提高生存质量。1.5.2放射线疗法放射线疗法即放疗，通过电离辐射来杀灭肿瘤细胞以达到抑制癌细胞生长和扩散的目的，是恶性乳腺肿瘤最常用的治疗方法，主要用于肿瘤切除后的辅助治疗。通过电离辐射作用于动物体后，使靶细胞致死或凋亡，由于辐射有较强的穿透特性及能量沉积作用，可使深部肿瘤得以治疗。通过辐射肿瘤细胞和正常组织细胞都会受到辐射作用，长期放疗对机体伤害很大。因此，使正常组织的损伤最小而使肿瘤细胞尽可能多的被杀灭，以提高肿瘤放射治疗的局部控制率或者提高治疗增益比，作为肿瘤放射治疗的基本原则。临床调查发现术后进行辅助放疗的恶性乳腺肿瘤患者，术后生存时[46,47]间能显著延长。由于设备、经济、操作等众多原因放射线疗法在兽医临床上应用并不十分广泛，主要用于原发性较大恶性肿瘤患犬的术后辅助治疗。1.5.3激素疗法激素疗法主要是通过降低雌激素水平或竞争性结合ER从而阻止雌激素对乳腺组织及肿瘤细胞的刺激，以抑制肿瘤细胞增殖。早期激素疗法主要通过切除卵巢降低雌激素水平的方式治疗恶性乳腺肿瘤，对乳腺肿瘤的预防及术治疗有显著的效果。他莫昔芬（Tamoxifen）可以与雌二醇竞争性结合ER并能阻止染色体基因活化，从而抑制肿瘤细胞的生长，该药物是目前临床上治疗女性乳腺肿瘤首选的抗雌激素药物。芳香酶抑制剂和LHRH可直接作用于激素的合成过程影响雌激素分泌，治疗乳腺肿瘤有[48]很好的效果。但是并非所有的乳腺肿瘤患者都适用于激素治疗，因为只有雌激素受体阳性的肿瘤患者应用激素治疗才有效。犬乳腺肿瘤与人类有许多共同之处，研究证实犬乳腺肿瘤60%以上具有雌激素依赖性，激素疗法在兽医临床上对犬的激素依赖性乳腺肿瘤同样适用。在兽医临床上激素抑制类药物的应用不广泛，目前犬乳腺肿瘤的激素治疗主要通过绝育手术，达到降低雌激素含量预防乳腺肿瘤的目的。8 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究1.5.4化学疗法化学治疗简称化疗是利用化学药物阻止癌细胞的增殖、浸润、转移，直至最终杀灭癌细胞的一种治疗方式。临床医学上，化学疗法普遍用于肿瘤术后的辅助治疗，对于延长术后生存期有重要意义。目前化疗药物主要分成三种类型：烷基化制剂（环磷酰胺、顺铂），主要影响DNA的合成；抗代谢药物（氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷）对抗DNA合成所需要的代谢物；天然产物（阿霉素、长春新碱、紫杉酚）来[49]自植物和真菌影响微管聚合、解聚及DNA、RNA的合成。很长时间以来，蒽环类抗生素是公认的治疗癌症种类最多的化疗药物，目前已经成为乳腺肿瘤辅助化疗的核心药物。在兽医临床上化学疗法也作为辅助性治疗手段用于恶性乳腺肿瘤或者严重转移的患犬，硫酸长春新碱对于发病早期的良性肿瘤能使其萎缩并最终达到治愈的效果，临床上常用于犬恶性乳腺肿瘤术后的化学辅助治疗。跟踪性调查显示，对于犬恶性乳腺肿瘤术后采用化学疗法作为辅助治疗，能够有效延长术后生存期。化学治疗药物药效猛烈，选择性差，效果比较显著，但伴有严重的毒副作用，对机体的损害较大。1.5.5中药治疗中医治疗乳腺肿瘤有很长历史，在中医古典文献中被称为“乳岩”，也有的称之为“乳石痈”或“乳栗”认为乳腺肿瘤为正气衰弱、邪气入侵所致，治疗以扶正驱邪[50]为根本，强调辩证论治，调节气血平衡。目前已知的具有直接抗癌作用的中药有七百多种，常用的主要有露蜂房、白花蛇舌草、鳖甲、山慈菇、冰球子、半枝莲等，乳腺肿瘤中药方剂化岩汤（人参、白术、黄芪、当归、忍冬藤、茜草根、白芥子、茯苓）、乳安汤（黄芪、茯苓、炒白术、山萸肉、女贞子、制首乌、枸杞、莪术、半枝莲）。单纯中药治疗对根除病灶、杀灭癌细胞效果不理想，常与手术及放化疗等治疗手段相结合，调节体质、增强疗效、减轻毒副作用。中医中药单独治疗乳腺肿瘤副作用小但效果缓慢、杀灭癌细胞效果不理想不能满足临床上快速治疗的需要。目前主要用于术后辅助治疗、放化疗的辅助治疗及年老体衰不能承受手术及放化疗副作用的恶性肿瘤病例，在提高患者机体免疫力、改善其生存质量、延缓复发、延长术后生存期具有显[51]著的效果。临床上主张中医中药治疗与其它治疗方法相结合，围术期通过中药的调理，可提高病人自身免疫力和对手术的承受能力，促进术后迅速恢复体质，为后续治疗打好基础。中药治疗针对病因辩证施治，配合其它治疗方法，对于增敏、减毒、降低副作用、缓解痛苦具有重要意义。犬乳腺肿瘤是犬最常见的肿瘤，临床诊断时注意与皮肤肿瘤、乳房囊肿及乳房炎进行区分，并通过询问畜主、临床观察、实验室检查及病理组织观察进行最终确诊。犬乳腺肿瘤是体表肿瘤，送诊病例一般能够通过视诊就能发现，并通过问诊、触诊可对肿瘤做出初步判断。不能确诊病例可进行X射线检查甚至活体组织检查，对怀疑可能发生扩散转移的病例，可通过超声断层扫描、核磁共振及X射线对胸腔或腹腔进行探查。手术治疗是临床上最常用的治疗方法，由于临床病例往往送诊较晚，肿瘤9 全日制硕士专业学位（毕业）论文存在时间较长，以影响犬的正常生命活动，已到了非手术不可的境地，这种情况下手术切除后生存期很短。在有条件的情况下，对早期乳腺肿瘤进行中药、放疗、化疗或激素治疗等保守疗法或者手术后进行辅助治疗，可能达到更理想的效果。1.6目的及意义现在各类犬的养殖量不断增加，犬肿瘤疾病也越来越多，尤其乳腺肿瘤最为常见，犬乳腺肿瘤的发生受多种内外致癌因素的影响。由于地域或环境因素的不同，饲养管理不当，激素药物的不合理使用，各种疾病的刺激都可促进乳腺肿瘤的发生和发展，乳腺肿瘤得不到及时治疗常发生恶化、扩散和转移，发病后死亡率很高，生存期较短。随着人民生活水平的提高，对宠物犬的重视和关爱程度越来越高，饲养犬的时间更长，数量不断增加，与此同时犬乳腺肿瘤的的发病量也直线上升，对宠物犬的生命安全造成严重威胁。乳腺肿瘤的发生需要各种致癌因子长期的共同作用，发病机制比较复杂，直接刺激因素尚不明确，需要进一步研究。由于地区不同环境不同，乳腺肿瘤发病情况及影响因素也具有很大差异。犬乳腺肿瘤的治疗目前仅是手术治疗，辅助治疗应用很少，复发率和死亡率都很高，对于术后辅助治疗效果有待进一步研究。有些学者在犬乳腺肿瘤摘除的手术方法及预后的影响因素进行了一些研究，对犬乳腺肿瘤术后辅助治疗的研究未见报道。本试验对保定地区乳腺肿瘤患犬进行了临床诊断及实验室诊断并通过病理组织学观察研究，对肿瘤的性质及发展情况进行判断。通过流行病学调查对本地区乳腺肿瘤相关因素进行分析，明确各相关因素对犬乳腺肿瘤的影响，有利于本地区乳腺肿瘤预防。治疗方面，本试验选用单纯手术治疗，手术后化学辅助治疗及手术后中药辅助治疗三种治疗方案进行对比，为本病的临床治疗筛选最理想的治疗方案。10 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究2材料与方法2.1材料2.1.1试验动物选取2013年12月到2014年12月期间来自河北农业大学动物医院收治并确诊的乳腺肿瘤患犬40例。2.1.2试验地点河北农业大学动物医院、河北农业大学动物医学院基础兽医实验室、河北农业大学动物医学院临床兽医实验室。2.1.3主要仪器X射线机深圳市迈克瑞电子有限公司呼吸麻醉机美国Harvard公司高压蒸汽灭菌锅上海博迅医疗器械有限公司电热恒温培养箱东南（浙江省宁波市）仪器器械有限公司生物组织组织包埋机科迪（浙江省金华市）仪器设备有限公司KD-BC包埋机保存台浙江省金华市科迪仪器设备有限公司KD-BL包埋机冷冻台浙江省金华市科迪仪器设备有限公司KD2508轮转切片机佳源兴业科技有限公司DP71生物显微镜日本奥林巴斯公司2.1.4主要药品及试剂氯化钠注射液、硫酸长春新碱、氨苄青霉素、生理盐水、乙醇、碘酒、苏木精染色液、尹红染色液、甘油、中性树胶。中草药：人参、白术、麦芽、黄芪、枸杞子、代赭石、乳香、茜草根、忍冬藤、白芥子、旋覆花、茯苓、六曲、山楂、生熟地、女贞子、当归。11 全日制硕士专业学位（毕业）论文2.2试验方法2.2.1流行病学调查通过询问畜主及临床观察对确诊的乳腺肿瘤患犬进行详细的流行病学调查，详细了解犬的发病情况和饲养环境，对患犬的年龄、品种、生存环境、日常饲喂以及生育、假孕、既往病史等情况作详细的记录和统计分析，并制作表格及分析图，显示统计分析结果。2.2.2一般检查体温检查：体温检测之前将体温表擦拭消毒并甩至35℃以下，然后涂上甘油做润滑剂，测温之前先轻轻抚摸动物的头部或被毛以增加亲和力，在畜主的配合下将犬尾抬高再轻轻旋转将体温表的2/3旋转插入直肠，用夹子把体温计固定在在患犬的被毛上，5-7min后缓慢取出擦拭干净并精确读数。视诊：注意观察病犬的精神状态，肿瘤的大小、位置，肿瘤表面破溃、充血及静脉怒张情况，并注意犬的其它生理功能是否受到影响。触诊：触诊时注意观察肿瘤的位置、硬度、有无粘连以及淋巴结的变化，初步鉴别肿瘤或其它病变。听诊：病犬站立保定，尽量选择安静的地方，听诊者朝向动物的头部，一手按在犬的肩胛部作支撑，另一手持听诊器，将听诊器紧贴病犬的皮肤并轻轻按压，防止摩擦及其它声音的干扰。主要听取心脏心音是否异常，肺脏的呼吸音是否异常。嗅诊：患病犬肿块没有溃疡的情况下没有异味，肿瘤破溃腐烂的病犬可闻到有恶臭味。2.2.3X射线诊断乳腺肿瘤的患犬在进行拍摄时多采用仰卧式保定并根据肿块的大小和位置进行调整，使肿块及可疑区域充分暴露，必要时进行多角度拍摄。拍摄之前要根据患犬自身情况对电压和曝光时间及投射波长进行调节，以达到最佳的拍摄效果。肿块、钙化造影及致密性团块是乳腺肿瘤最直接的表征，诊断时要根据钙化灶、密度及边界特点等综合特征进行判断。有学者研究证实肿瘤细胞活动分泌或坏死的癌细胞破碎导致钙盐聚集沉淀形成钙化灶。钙化颗粒的大小及数目与乳腺肿瘤恶性程度密切相关，恶性乳腺肿瘤X光片表现为短棒状或不规则钙化斑点，肿块边缘呈针尖状；良性肿瘤表现为少量中空环状钙化，部分肿瘤钙化不明显。检查时注意血管增多、腺体紊乱、灶性致密阴影等乳腺肿瘤间接表征。12 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究2.2.4病理组织学观察手术切除乳腺肿瘤后及时将新鲜的肿瘤病料保存于10%多聚甲醛溶液中，防止组织细胞自溶，注意保存24h后及时更换一次保存液，以除去组织中的血液及杂质，保持保存液的纯度。（1）取材：取出固定液中的组织块，用手术刀修整为边长为0.5cm的立方体组织块。取材时应尽量做到切取完整而全面的组织块，要求从被膜到深部组织都应该取到，以显示组织器官的完整结构。（2）洗涤：将修好的组织块放入浸蜡篮做好标记并置于水龙头下冲洗组织24h。注意观察并调节流水速度，以能使组织块随水轻轻翻动为宜，水量不可过大，否则可能会冲坏组织。（3）脱水：洗涤完成后，将组织取出，用滤纸吸尽组织上的水份，随后依次放入70%乙醇中3h、80%乙醇中3h、95%乙醇中2h、100%Ⅰ号乙醇中1h和100%Ⅱ号乙醇0.5h进行脱水处理。（4）透明：将脱水好的肿瘤组织从100%Ⅱ号乙醇溶液中取出，用滤纸吸干表面液体后浸入二甲苯Ⅰ溶液中25min左右进行透明，然后再取出放入到二甲苯Ⅱ溶液中透明0.5h左右。应该注意的是由于所取乳腺肿瘤组织的位置不同，其对透明剂的反应灵敏程度不同，所需透明时间也各有不相同。在透明过程中应时刻注意组织块的变化，避免透明不足或透明过度，影响后续的切片制作质量。（5）浸蜡：先将纯化后的石蜡完全熔化，然后置于65℃和60℃的浸蜡池内备用。然后取出组织块依次置于65℃蜡Ⅰ浸泡0.5h，60℃蜡Ⅱ浸泡0.5h。（6）包埋：利用石蜡病理包埋机将浸蜡完全的组织进行包埋，将组织选择好合适的方向和位置置于包埋盒内，灌蜡包埋，将包埋好的组织连同包埋盒置于病理石蜡包埋冷台机上迅速凝固。（7）切片：将蜡块修正成合适的大小即可用石蜡切片机进行连续切片，切片厚度为3-5μm。（8）贴片：将硝酸甘油包被的载玻片光面朝上置于41℃KD-BC包埋机保存台上，滴上蒸馏水，选取合适的切片，置于载玻片上的蒸馏水中展开，充分展开后用纱布及时吸取多余的蒸馏水，使组织固定于载玻片上，做好标记放在36.5℃培养箱烘烤12h。贴片时每10张组织选取1张，每个组织块选取3张。（9）染色：本试验采用HE染色法对乳腺肿瘤进行染色，按照下列步骤进行操作：A.脱蜡：把载玻片放入染缸内，先后倒入二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ溶液，脱蜡7-10min。B.复水：二甲苯-纯乙醇（1:1）浸泡3-5min，再依次放入无水乙醇中3-5min，95%乙醇中3-5min，90%乙醇中3-5min，85%乙醇中3-5min，80%乙醇中3-5min，70%乙醇中3-5min，最后浸入蒸馏水中2min完成复水。13 全日制硕士专业学位（毕业）论文C.染核：依次放入苏木精染缸染色18-20min，自来水洗缸5min洗去浮色，再浸入1%盐酸乙醇、0.5%氨水分别30s最后用自来水蓝化5min。D.染质：将组织分别放入70%乙醇中3-5min，85%中乙醇3-5min，95%乙醇中3-5min，再用1%伊红染液染色6min，95%乙醇1min，无水乙醇Ⅰ和无水乙醇Ⅱ作用2-3min。E.透明切片：依次用二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡7-10min。封片：迅速将透明后的切片从染色缸中取出，切片一面朝上，平放在铺有吸水纸的桌面上，用吸水纸吸尽组织周围的透明液，然后用中性树胶进行封片。然后将其放于恒温培养箱中烘干后即可在生物显微镜下观察。2.2.5治疗试验试验分组：试验将恶性乳腺肿瘤患犬分成三组，对照组（单纯手术治疗组）、化学辅助治疗组、中药辅助治疗组，每组各10只。对照组（单纯手术治疗组）术前检查：手术前应患病犬做全身检查，免疫力低下或高热的病犬，不能进行手术的病犬，先进性常规治疗，体质基本恢复后再进行手术。禁食：手术前对病犬绝食8h并保证充足的饮水。麻醉：使用呼吸式麻醉机对病犬进行全身麻醉。保定：根据肿瘤生长的部位将犬仰卧或侧卧保定，充分暴露肿瘤及周边部位，剃毛，清洗，用碘酒进行消毒，3min后用迅速脱碘，并尽快实施手术。手术过程：根据不同的发病情况采取不同的手术方式，常用的有四种手术方法，主要包括单纯肿瘤摘除术、区域性乳腺切除术、单侧乳腺切除术和全部乳腺切除术。单纯肿瘤摘除术仅切除肿瘤病变或其所在的单个乳腺组织，适于较小的肿瘤。区域乳腺摘除术同时切除肿瘤病灶所在乳腺及相邻或相关联的乳腺组织，适于肿瘤与深层乳腺组织粘连，不易分离的病变。单侧乳腺摘除术切除患病部位同侧所有乳腺组织，仅保留对侧健康组织。全部乳腺摘除术将病犬全部乳腺组织摘除，适用于弥漫性肿瘤或多发性病灶，这类病例病变不集中，所有乳腺组织都可能有潜在的病灶。手术前根据肿瘤的大小、范围确定手术方法，保证切除所有病变，没有残留。胸部两对乳腺组织紧贴胸壁并与胸部肌肉筋膜相连紧密，手术切除时需小心仔细分离将其剥离，保留正常组织并确保将病灶彻底切除。若肌肉、筋膜及其它非乳腺组织已经被肿瘤细胞侵蚀，需扩大切除范围，必须保证所有可见病变完全清除。腋下淋巴结与胸部乳腺组织相连，位置较深而且紧邻运动神经丛，切除时危险性大，未发现明显的淋巴转移时一般不予摘除。腹股沟淋巴结位于体表浅层，并紧邻腹股沟乳腺组织，比较容易发生扩散，摘除时危险性小，所以腹股沟乳腺发生病变时将连同淋巴结一起切除。手术前先观察肿瘤表面血管分布情况，环绕肿瘤边缘作半月形切口，切口位置距离肿瘤基部边缘约1cm。肿瘤一般与皮肤紧密连接，手术时将皮肤一起切除，切开皮肤并进一步深层分离，对进入肿瘤的血管进行双重结扎后再切断。未结扎不慎切断的较大血管造成出血14 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究的，及时用止血钳止血再结扎，随时用灭菌纱布清理出血，保证手术部位清洁。胸部乳腺肿瘤组织切除时尤其注意腹壁后浅动脉，以免造成失血过多。肿瘤切除后修剪并清理伤口，确保病变切除干净。用氯化钠注射液冲洗伤口，除去血迹和冲洗液，撒布氨苄青霉素进行消毒杀菌，闭合伤口进行缝合。缝合一定要平顺整齐，皮肤富余处可进行修剪，用碘酒消毒创面并包扎，套戴伊丽莎白项圈防止舔舐伤口。手术过程中注意及时结扎血管，防止出血过多，尤其是小型犬。为确保彻底切除病灶，在不易分辨正常组织和病变的情况下，应扩大切除范围，以保证没有残留。术后每天对患犬补液、消炎、止血、减少渗出等，连续用药5天，每天1次，同时控制食量，防止腹压过大，8-10天后拆线。化学辅助治疗组术后7天开始化学治疗，化学治疗药物选用硫酸长春新碱，剂量为0.02-0.05mg每千克体重，加氯化钠注射液200mL，前肢内侧皮下头静脉注射，8-10d化疗一次，连续治疗3次。硫酸长春新碱神经毒性较强，用药时要严格控制剂量，防止过量引起剧烈的毒副反应。静脉注射时要看护好患犬，避免运动导致药液外漏引起肌肉坏死。化疗期间根据胃肠道反应酌情使用胃粘膜保护剂，副作用反应强烈或体质低下难以耐受化疗毒副作用的及时停止化疗。中药辅助治疗组术后7天后开始中药治疗，中药辅助治疗方剂为化岩汤内服，忍冬藤15g，白术30g，白芥子3g，党参15g，黄芪15g，当归15g，茜草根5g，茯苓5g；加水煎制取汁灌服，每天一次，30d为一个治疗周期，用药至少一周期。治疗过程中及时根据症状进行药物加减，疼痛采食下降的病犬添加加麦芽、六曲、山楂、乳香等，贫血或白细胞减少时要添加生熟地、女贞子等，呕吐严重则加旋覆花。电话回访术后六个月进行电话回访，向畜主询问病犬生存状态和健康情况，并作详细记录。15 全日制硕士专业学位（毕业）论文3结果3.1流行病学调查3.1.1犬乳腺肿瘤发生与年龄的关系表1不同年龄犬乳腺肿瘤发病数量Table1Thenumberofmammarytumorcasesindifferentagesofdogs年龄病例数百分比AgeCaseNo.Percentage≤100200325%425%537.5%637.5%737.5%8512.5%9410%10512.5%11615%12≥717.5%图1不同年龄犬乳腺肿瘤发病数量Fig.1Thenumberofmammarytumorcasesindifferentagesofdogs16 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究由图1可见：保定地区犬乳腺肿瘤的发病情况与犬的年龄之间存在一定联系，2岁以下没有临床病例，3、4岁发病各有2例，5、6、7岁分别发病3例，8、10岁发病各5例，9岁4例，11岁6例，12以上发病7例，可知保定地区犬乳腺肿瘤发病率随年龄增大而升高，主要集中在7岁以上老龄犬，共有27例，占总病例数的67.5%（27/40）。3.1.2犬乳腺肿瘤发生与品种的关系表2不同品种犬乳腺肿瘤发病数Table2Thenumberofmammarytumorcasesindifferentbreedsofdogs品种病例数百分比BreedCaseNo.Percentage北京犬717.5%Pekingese贵宾犬25.0%Poodle雪纳瑞12.5%Schnauzer德国牧羊犬820.0%GermanShepherdDog藏獒犬25.0%Canislupusfamiliaris西施犬512.5%ShihTzu英国可卡犬12.5%EnglishCockerSpaniel松狮犬12.5%ChowChow阿拉斯加雪橇犬410.0%AlaskanMalamute萨摩耶犬410.0%Canislupusfamiliaris杂种犬512.5%Mutt17 全日制硕士专业学位（毕业）论文图2不同品种犬乳腺肿瘤发病数Fig.2Thenumberofmammarytumorcasesindifferentbreedsofdogs由图2可见，各品种的犬都有可能发生乳腺肿瘤，不同品种之间发生率差异很大，在一些特定品种间发病率高。德国牧羊犬乳腺肿瘤发病率最高，达到20.0%（8/40），其次是北京犬17.5%（7/40），西施和杂种犬12.5%（5/40），贵妇、雪纳瑞、藏獒、可卡、松狮、阿拉斯加、萨摩在保定地区也有发病。可见保定地区德国牧羊犬和北京犬为乳腺肿瘤高发品种。3.1.3犬乳腺肿瘤发生与发病部位之间的关系表3不同部位乳腺肿瘤发病情况（1）Table3Theincidenceofcaninemammarytumorindifferentmammarytissue(A)乳腺组织病例数百分比MammarytissueCaseNo.Percentage头侧胸对12.5%Cephalothorax尾侧胸对512.5%Caudalchest头侧腹对512.5%Cephalicabdomen尾侧腹对2255.0%Caudalabdomen腹股沟对717.5%Groin18 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图3不同部位乳腺肿瘤发病情况（1）Fig.3Theincidenceofcaninemammarytumorindifferentmammarytissue(A)表4不同部位乳腺肿瘤发病情况（2）Table4Theincidenceofcaninemammarytumorindifferentmammarytissue(B)部位左侧右侧双侧LocationLeftRightBilateral病例数21109CaseNo.百分例52.5%25.0%22.5%Percentage图4不同部位乳腺肿瘤发病情况(2）Fig.4Theincidenceofcaninemammarytumorindifferentmammarytissue(B)19 全日制硕士专业学位（毕业）论文犬一般有五对乳腺，根据其分布情况可分为头侧胸对乳腺、尾侧胸对乳腺、头侧腹对乳腺、尾侧腹对乳腺及腹股沟对乳腺。本试验中收集的犬乳腺肿瘤病例，其发病部位主要集中在尾侧腹对乳腺组织，有22例，占总病例数的55.0%（22/40），头侧胸对乳腺2.5%（1/40）、尾侧胸对乳腺12.5%（5/40）、头侧腹对乳腺12.5%（5/40）及腹股沟对乳腺17.5%（7/40），从头部到尾侧乳腺组织肿瘤发生的概率呈上升趋势。另外，乳腺肿瘤在左侧乳腺组织发病的21例，占52.5%（21/40）；右侧10例，占25.0%（10/40）双侧都有肿瘤病变的有9例，占总病例数22.5%（9/40）。保定地区犬乳腺肿瘤主要尾侧腹对乳腺组织，左侧单乳腺组织发病率最高。3.1.4犬乳腺肿瘤的发生与既往病史的关系表5既往病史与犬乳腺肿瘤的关系Table5Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthemedicalhistory乳腺良性疾病病史子宫蓄脓流产假孕BenignmammaryMedicalhistoyPyometraMiscarriageFalsepregnancydisease病例数22151828CaseNo.百分比55.0%37.5%45.0%70.0%Percentage图5既往病史与犬乳腺肿瘤的关系Fig.5Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthemedicalhistory临床收集的40例犬乳腺肿瘤病例中有乳腺良性病史的有22例，占总病例数的55.0%（22/40），曾经得过子宫蓄脓的病犬有15例，占总病例数的37.5%（15/40），有流产史的有18例占45.8%（18/40），曾经出现假孕现象的有28例占70.0%（28/40），可见乳腺良性疾病、子宫蓄脓、流产及假孕等病史对犬乳腺肿瘤的发生有一定的诱导作用，是犬乳腺肿瘤发生的危险因素。20 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究3.1.5犬乳腺肿瘤与生育史的关系表6犬乳腺肿瘤与生育史的关系Table6Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthechildbirth生育史未生育单胎两胎以上绝育childbearingNulliparousSingletireOvertwicefertilitySterilizationhistory病例数22855CaseNo.百分比55.0%20.0%12.5%12.5%Percentage图6犬乳腺肿瘤与生育史的关系Fig.6Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthechildbirth由图表可见生育史是犬乳腺肿瘤发生的重要影响因素，调查结果表明未生育的母犬发病率最高，有22例，占55.0%（22/40），生育单胎有5例占20.0%（8/40），做过绝育手术及生育两胎以上的发病较低，各有5例，占12.5%（5/40），未生育是犬乳腺肿瘤发生的危险因素。3.1.6犬乳腺肿瘤的发生与日常饮食的关系表7犬乳腺肿瘤与日常饮食的关系Table7Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthediet日常饮食犬粮饭菜肉类DietsDogfood病例数12523CaseNo.百分比30.0%12.5%57.5%Percentage21 全日制硕士专业学位（毕业）论文图7犬乳腺肿瘤与日常饮食的关系Fig.7Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthediet由表7、图7可见饮食习惯对犬乳腺肿瘤的发生有一定的影响，本次调查保定地区犬乳腺肿瘤临床病例，日常饲喂以犬粮为主的有12例，占30.0%（12/40），以饭菜为主有5例，占12.5%（5/40），以肉类为主患犬有23例，占57.5%（23/40），可见肉食为主的饮食是犬乳腺肿瘤发生的危险因素。3.1.7犬乳腺肿瘤的发生与生活环境的关系表8犬乳腺肿瘤与生活环境的关系Table8Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthesurvivalenvironment生活环境城市农村厂区EnvironmentTownCountryFactory病例数22513CaseNo.百分比55.0%12.5%32.5%Percentage22 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图8犬乳腺肿瘤与生活环境的关系Fig.8Relationshipbetweenthecaninemammarytumorandthesurvivalenvironment流行病学调查显示保定地区犬乳腺肿瘤的发生与生活环境有一定的联系（结果见表8、图8）。保定地区犬乳腺肿瘤病例中，城市中犬乳腺肿瘤发病率最高，有22例，占55.0%（22/40）；其次是厂区有13例，占32.5%（13/40），农村发病率最低，仅有5例，占12.5%（5/40）。3.1.8犬乳腺肿瘤的发生与肿瘤性质的关系表9不同性质乳腺肿瘤发病率Table9Incidenceofcaninemammarytumorofbenignormalignant肿瘤性质病例数百分比TumoroustypesCaseNo.Percentage良性1025%Benign恶性3075%Malignant试验收集的40例犬乳腺肿瘤病例，经过系统诊断和病理组织学观察最终确诊良性病例有10例占25.0%（10/40），恶性肿瘤30例，占75.0%（30/40），可见保定地区犬乳腺肿瘤临床病例以恶性肿瘤为主。3.2乳腺肿瘤患犬的临床症状送诊的患犬发病时间不同，精神状态及临床症状差异较大。大多数犬表现为疲劳、昏睡、四肢无力、体重减轻、食欲下降等全身症状，肿瘤最大直径从3cm-35cm大小不等，个别患犬肿瘤个体较大，遍及多个乳腺组织，已经影响正常的生命活动。肿瘤发展到一定时期，血管突出明显，甚至发生破溃、感染，流出暗红色粘液，具有腥臭味，体温较高，局部淋巴结肿大。乳腺良性肿瘤是椭圆形或圆形肿块，突出体表，生23 全日制硕士专业学位（毕业）论文长缓慢，甚至会停止生长，多呈单发性，病灶与周围正常组织界限明显，挤压无疼痛，具有游离性，并且触摸感觉质地坚实。乳腺恶性肿瘤，生长速度快，多呈浸润性或外生性生长，发展迅速，多数无包膜与边组织链接紧密期间无明显界限，游离性差，对组织破坏严重，容易发生脱落坏死、出血、溃疡及炎症。图9德国牧羊犬，9岁，母，胸部和腹部有两个肿瘤，瘤体较大Fig.9GermanShepherdDog,6yearsold,old,female,twolargertumorsinthechestandabdomen.图9北京犬，9岁，母，“菜花状”肿瘤Fig.9Pekingese,9yearsold,female,tumorlikesacauliflower.24 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图10松狮犬，6岁，母，肿瘤表面破溃，瘤体较大Fig.10ChowChow,6yearsold,female,ulcerationinthesurfaceofthetumorandthetumorwaslager.图11萨摩耶犬，11岁，母，肿瘤表面血管清晰Fig.11Samoyed,11yearsold,female.Thebloodvesselswareclearinthesurfaceofthetumor.3.3X光诊断经X射线诊断，犬乳腺肿瘤钙化灶明显，肿瘤直径大于临床触诊，有6例乳腺肿瘤发生了明显的转移，其中3例发生明显扩散转移至胸腔，2例转移到腹腔。乳腺恶性肿瘤内钙化灶明显，多程簇状或砂砾样，形成椭圆形高密度团块影，边缘分界不清晰，呈“毛刺”状，周边见低密度“晕征”（如图13），恶性肿瘤发展迅速快、供血不足，内部组织液化坏死形成低密度暗影区（如图14）。良性乳腺肿瘤一般肿25 全日制硕士专业学位（毕业）论文块形态比较规则，钙化灶不明显或少量中空环状钙化，边界清楚、密度均匀，良性肿瘤表现为少量中空环状钙化，部分肿瘤钙化不明显。图13西施犬，母，7岁，致密型乳腺肿瘤，肿块明显突出体表，密度均匀，钙化不显著，边缘圆滑，分界明显。发生肺转移，肺部有短棒状或不规则钙化斑点Fig.13ShihTzu,7yearsold,female.Densemammarytumor.ThetumorwithUniformdensityclearlyprotrudedsurface.Withoutsignificantcalcification,thetumorhadroundededgesandclearboundaries.Therewarespotsofcalcificationlikeshort-rodorirregularinthelungs.图14杂种犬，母，9岁，恶性乳腺肿瘤，高密度钙化团块，边缘不规则，呈蟹足状，沙粒样钙化，肿瘤内部组织液性坏死，形成暗区Fig.14Crossbreeddog,7yearsold,female.Malignantmammarytumor.Highdensitycalcifiedmass,irregularmargin,calcificationasthesandorthecrab,liquefactivenecrosisinside,formdarkspace.26 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图15北京犬母，9岁，腹股沟处良性乳腺肿瘤，椭圆形致密肿块，与周围组织分界清晰，边缘光滑无触角Fig.15Pekingese,7yearsold,female.Therewasabenignmammarytumorinthegroin.Themasswasovalanddense.Thetumorhadclearboundarieswiththesurroundingtissue.Theedgeswaresmoothwithouttentacles.图16可卡犬，母，11岁，恶性乳腺肿瘤，钙化灶明显，形态不规则，瘤体较小Fig.16CockerSpaniel,11yearsold,female.Malignantmammarytumor.Therearetwoobviouscalcificationinabdominal.Thetumorsaresmallandirregular.27 全日制硕士专业学位（毕业）论文3.4病理组织学观察表10不同类型乳腺肿瘤发病率Table10Incidenceofcaninemammarytumorofdifferenttypes肿瘤类型病例数百分比TumorstypesCaseNo.Percentage恶性肌上皮细胞瘤615.0%Malignantmyoepithelialcelltumor良性混合瘤717.5%Benignmixedtumor管状腺癌1127.5%Tubularadenocarcinoma恶性混合瘤820.0%Malignantmixedcelltumor纤维腺瘤37.5%Fibroadenoma髓样癌512.5%Medullarycarcinoma犬良性乳腺肿瘤以纤维腺瘤和良性混合瘤为主，分别占到总病例数的7.5%（3/40）和17.5%（7/40）。恶性肿瘤主要有恶性肌上皮细胞瘤15.0%（6/40）、髓样癌10.0%（4/40）、恶性混合瘤20%（8/40），管状腺癌发病率最高有11例，占27.5%（11/40）。纤维腺瘤腺管外围结缔组织异常增生，结构紧密，管腔内有异常分泌物，肿瘤细胞呈纤维样结构（如图17）；良性混合瘤中细胞结构完整，边界清晰，乳腺导管上皮细胞分裂象较少，增生明显，形成上皮细胞团（如图18）。恶性肌上皮细胞瘤，瘤细胞呈螺旋或纤维束状排列，具有肌上皮细胞形态，细胞界限模糊，核圆形异形性小（如图19）；髓样癌癌细胞排列疏松多孔，没有腺泡及腺管结构，细胞体较大，细胞核突出（如图20）；管状腺癌癌细胞组织呈腺泡状或腺管状分布或充满腺泡或腺管形成癌细胞团，癌细胞团大小不等，多成椭圆形，周围结缔组织有散在的癌细胞，白细胞浸润形成空腔（如图21）；恶性混合瘤瘤细胞细胞核较大，核分裂及巨核现象突出，癌细胞充满腺泡和腺管，形成巨大的癌细胞团，腺泡腺管结构被破坏（如图22）；部分肿瘤发展时期较长发生液化坏死，没有完整的组织细胞结构（如图23）。28 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图17纤维腺瘤，腺管扩张，腺泡大小不一，周围结缔组织增生(HE)Fig.17Fibroadenoma.Therearedilatationofthetubesandtheaciniofvarioussizes.Connectivetissueproliferatedaroundthetubesandtheacini.(HE)图18良性混合瘤，上皮细胞增生，细胞结构清晰（HE）Fig.18Benignmixedtumor.Glandularepithelialcellsproliferated.Thecellularstructureisveryclear.（HE）29 全日制硕士专业学位（毕业）论文图19恶性肌上皮细胞瘤，瘤细胞呈螺旋状或纤维束状排列，细胞边界模糊，呈空泡状(HE)Fig.19Malignantmyoepithelialcelltumor.Thecellsofthetumorerearrangedinaspiralorfiberbundles.Theboundariesofthecellsareblurandthevacuoleshadaclearappearance.(HE)图20髓样癌,无腺泡或腺管结构，细胞核呈圆形，核仁明显（HE）Fig.20Medullarycarcinoma.Thereisnocinarorductalstructures.Thenucleiareroundandthenucleoluswareobviou(HE)30 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究图21管状腺癌，癌细胞呈腺管状或腺泡状分布，结缔组织内有散在的癌细胞，白细胞浸润，多成空泡状(HE)Fig.21Tubularadenocarcinoma.Cancercellsarearrangedalongtheductortheacini.TherearescatteredcancersintheconnectivetissuewiththeLeukocyteinfiltrationandthevacuoles.(HE)图22恶性混合细胞瘤，细胞边界不清，多核和巨核现象突出，核仁清晰，腺上皮细胞增生，癌细胞充满整个组织(HE)Fig.22Malignantmixedcelltumor.Thecytoplasmandcellbordersarenotrecognizable.Prominentnucleoli,irregularnuclearprofilesandpolykaryonappeare.Epithelialcellsproliferateandthecancercellsfilltheentireorganization.(HE)31 全日制硕士专业学位（毕业）论文图23恶性肿瘤，左侧液化坏死，没有完整的组织细胞结构(HE)Fig.23Malignanttumor.ThereisnointactcellstructurewithLiquefactionnecrosisintheleft.(HE)3.5治疗效果表106个月生存率比较Table10Comparisonof6-monthsurvivalrate治疗方法存活数存活率TreatmentSurvivalcasesSurvivalrate单纯手术治疗550%Surgeryalone术后辅助化学治疗880%Chemotherapyaftersurgery术后辅助中药治疗660%Chinesemedicineaftersurgery通过三种治疗方案对犬恶性乳腺肿瘤进行治疗结果如表10所示，单纯手术切除6个月生存率为50%，术后化疗生存率为80%，术后中药治疗生存率为60%。化学辅助治疗组生存率高于中药辅助治疗组高于单纯手术治疗组，表明术后化学辅助治疗及术后中药辅助治疗对提高犬恶性乳腺肿瘤患犬的术后生存期都有一定的的效果，化学辅助治疗效果最好。32 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究4讨论4.1犬乳腺肿瘤的发生与各因素的关系4.1.1犬乳腺肿瘤发生与年龄的关系临床调查统计显示年龄因素对犬乳腺肿瘤的发生率有一定的影响，随年龄的增长发病率增高。乳腺肿瘤多发于老年个体，一方面是因为肿瘤的形成是不同的致癌因子在不同时期长期发挥作用多共同影响的结果，致癌因素的刺激需要相对较长时期的累积才能发生质的变化；另一方面老年时期机体抵抗力下降，对突变细胞免疫监控能力减弱，致使恶性细胞不能被及时清除，形成恶性增殖；另外卵巢功能减弱、内分泌失调，孕酮水平降低，雌激素长期保持较高水平长期刺激乳腺组织，也是肿瘤发病率较[52]高的重要原因。年龄结构对乳腺肿瘤的发病率有很大的影响，人类肿瘤流行病学研究表明：人类乳腺肿瘤主要集中40-60岁之间发病，发病数占总数的63.03%，30岁[53]以下患者发病比例为4.34%。国外针对于西方白种人的调查显示，乳腺肿瘤的发病[54]与年龄之间有显著地相关性，乳腺肿瘤的发生率随年龄的增加而增加。人类乳腺肿瘤流行病学研究证实乳腺肿瘤多发于老年人，55岁以上老年妇女的乳腺肿瘤发病率[55][56]比较高。近期有学者研究证实犬乳腺肿瘤发病率与犬的年龄结构密切相关，发病犬年龄大小不等，集中于7岁以后老龄犬，年龄与犬乳腺肿瘤发病率呈正相关，与本次调查结果较为一致。4.1.2乳腺肿瘤发生与品种的关系兽医临床调查及文献资料显示，乳腺肿瘤的发生率与犬的品种之间紧密相关，不[57]同品种的犬发生该病的概率有很大差异。犬乳腺肿瘤在特定品种间发病率较高可能与基因突变及遗传倾向性有关。研究发现，BRCA1和BRCA2的突变基因携带者[58][59]乳腺肿瘤发病率高于平均水平。姚华对犬乳腺肿瘤发病率的调查研究发现德国牧羊犬最容易发生本病，其次是西施犬、北京犬和杂种犬，与本试验调查一致。卢国[60]卫的调查发现狮子犬、博美犬、萨摩耶犬、德国牧羊犬是乳腺肿瘤高发犬种。王彤[61]光研究北京犬、西施犬及杂种发病率高于其它品种犬，本次调查结果与卢卫国及王彤光研究结论略有差异，其原因可能是不同地区各品种犬养殖量差异较大，保定地区德国牧羊犬及北京犬饲养量相对较多。4.1.3犬乳腺肿瘤发生与发病部位之间的关系犬乳腺主要由乳头及其下乳腺组织构成，一般有5对乳头分为左右两排，根据5对乳头所分部的位置，由前向后依次称之为头侧胸对、尾侧胸对、头侧腹对、尾侧腹33 全日制硕士专业学位（毕业）论文[62]对和腹股沟对。研究显示尾侧腹对乳腺及腹股沟对乳腺组织肿瘤发生率比其它各对乳腺要高，左侧乳腺发病率高于右侧，其原因可能与血液供应及淋巴循环有关。临床上犬乳腺肿瘤在双侧乳腺或多对乳腺同时发病的病例占很大比例，究其原因可能是发病时间较长肿瘤生长蔓延至邻近乳腺组织或者发生扩散至不相邻的乳腺，在多处乳腺组织同时出现原发性肿瘤的概率较低。4.1.4犬乳腺肿瘤的发生与生活环境的关系犬发生乳腺肿瘤受多种内外因素的影响，发病的的原因尚不明确，而自身遗传因素及自然环境中各类物理因素、化学因素及生物性致癌因素的长期刺激，对乳腺细胞[63]的癌变和肿瘤发生和发展有重要的诱导和促进作用。有调查显示，化工厂区肿瘤的发生率是全国平均水平的3.1倍。城市和厂区的犬乳腺肿瘤发病较多和犬的生活环境及饮食密切相关，城市人口密集、工业集中、环境污染严重，充满各类工业污染物，[64]尤其是食物或水中各种化学物质，可促发细胞癌变。另外城市里的宠物犬长期饲喂火腿、腊肉等盐腌熏烤的食物，这些食物在加工过程中含有大量的亚硝酸盐，在特定的加工条件下亚硝酸盐发生化学作用转变为亚硝胺类化合物，亚硝胺类化合物是强致癌物，极易诱发细胞突变，长时间接触或小剂量误食都可刺激细胞癌变。厂区内化工原料及各类有害刺激相对集中，另外工厂对犬的饲喂不够重视，饲喂剩饭剩菜比较普遍并常伴有霉变的情况，所以城市和厂区犬乳腺肿瘤病例相对较多。发霉变质饲料容[65]易引发癌变，长期饲喂霉败食物，肿瘤发病率就高。经调查家庭饲养的宠物犬接触腐败食物的可能性较小，但企业或工厂里的犬有可能饲喂剩饭剩菜甚至变质食物，这也增加了犬患乳腺肿瘤的可能性。4.1.5犬乳腺肿瘤的发生与既往病史的关系通过对乳腺肿瘤患犬既往病史调查分析发现，乳腺良性疾病、子宫蓄脓、流产及假孕症等病史对乳腺肿瘤发生有一定的诱发作用，是乳腺肿瘤发生的的危险因素。犬乳腺肿瘤是内外各种致癌因子长期刺激的结果，乳腺组织是雌激素靶组织，雌激素和生长激素在乳腺组织发挥作用，刺激乳腺组织生长发育，对肿瘤的发生也有重要的刺激作用。乳腺良性疾病及子宫蓄脓、流产、假孕病史等对乳腺肿瘤的诱发和促进作用[66]可能与激素有关。Hartmann研究发现乳腺良性疾病患者乳腺肿瘤发生概率较高，是平均水平的1.6倍，而且乳腺肿瘤与良性乳腺疾病多发于同一乳腺组织，证实大多数乳腺良性病变是诱发肿瘤的重要因素。国内资料Meta分析结果显示流产会增加妇女[67]乳腺肿瘤发生的危险性。戴燕对某部乳腺肿瘤流行病学的调查发现，有流产史的适龄妇女乳腺肿瘤发病率较高。有研究证实乳痛症、乳腺增生及乳腺炎生等乳腺良性疾[68]病对乳腺肿瘤的发生有一定促进作用。乳腺增生性疾病在雌激素或其它危险因素的刺激下可诱发为乳腺导管癌。乳腺良性疾病及激素等对乳腺长期刺激，可能诱发其形成非典型增生性疾病，如果的不能及时发现和治疗，在激素及其它危险因素的刺激下34 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究可发生癌变，形成肿瘤。流产对犬乳腺肿瘤的影响也是通过激素发挥作用，妊娠过程中在高水平的雌激素持续刺使激乳腺组织使其进一步发育和增殖，激素平衡可以使这些细胞成熟和分化，使机体维持正常状态。流产会破坏激素平衡状态，处于增殖期的乳腺上皮细胞在分化阶段失去激素的保护，对各种致病因素极为敏感，易诱发癌变。另外流产会打破正常的激素平衡，使激素水平剧烈变化，对乳腺组织造成不良刺激，[69]增加了乳腺肿瘤发生的危险。假孕症、子宫蓄脓也会引起内分泌紊乱，造成雌激素、孕激素失衡，对乳腺组织形成不良刺激，促进乳腺肿瘤的发生。4.1.6犬乳腺肿瘤与生育史的关系结果显示，生育史对乳腺肿瘤的发生有很大影响，未生育的犬发病率最高，多次生育及早期绝育的犬发病率低。有学者认为生育对雌激素的影响较大从而对乳腺肿瘤的发生和发展起到抑制或促进作用。大多数乳腺肿瘤是特定激素的靶器官，肿瘤组织[70]中具有特异性的激素受体，全部乳腺肿瘤病例的50%以上具有依赖激素的特性。乳腺肿瘤的生物学很复杂，但卵巢激素是乳腺肿瘤发生发展一个关健因素，这些激索可单独诱导细胞分裂，雌激素与孕酮叠加诱导性更强。生育哺乳期这些激素水平下降，所以多次生育对犬乳腺肿瘤的发生有一定的保护作用。在妊娠期雌性激素的调节作用在某种程度上能够抑制乳腺肿瘤的发生和发展。生育哺乳期在雌激素的调节和刺激影响下能够促进乳腺组织发育并能推迟排卵周期，与此同时体内雌激素能够在长时间内保持在低水平状态，促使腺细胞保持稳定而不易发生癌变。Murff在生育情况与乳腺肿瘤相关性的研究中证实生育可预防或抑制乳腺肿瘤的发生，生育胎次与乳腺肿瘤发[71]生的概率呈负相关。另一项研究也证实乳腺肿瘤的发生与生育状况密切相关，无生育史的适龄妇女乳腺肿瘤发病率较高，与本试验结果较为一致。4.1.7乳腺肿瘤的发生与日常饮食的关系饮食习惯对各种疾病的发生均有一定的影响，既能促进又能抑制肿瘤的发生。肿瘤的发生是多因素综合影响的结果，饮食习惯及生活环境通过物理、化学作用长期刺激机体，对乳腺肿瘤的发病和发展具有一定的影响，据专家估计50%乳腺肿瘤发生与[72]饮食有关。试验统计显示保定地区以肉食为主的犬乳腺肿瘤发生的危险性较大，肉[73]类饮食高发乳腺肿瘤可能与肥胖及加工过程中各类致癌物质有关。徐秋菊在肿瘤与饮食关系的研究中发现经常食用熟肉、奶油及动物油脂类食品对乳腺肿瘤的发生有促进作用，而瓜果蔬菜、低脂肪、奶制品则对乳腺肿瘤具有一定的预防作用。其它腌制、油炸、熏烤的食品如腊肉、火腿、香肠及烤肉等，由于加工制作时会发生各种化学反应，各种添加剂相互作用容易产生很多环芳烃和杂环胺，长期接触或食用这些有害物[74]质会刺激细胞癌变，因此长期饲喂这类食物也诱发乳腺癌。统计资料显示发现肥胖和肉类食谱的犬易发乳腺肿瘤，与本试验结果较为一致。35 全日制硕士专业学位（毕业）论文4.1.8犬乳腺肿瘤的发生与肿瘤性质的关系[75]有文献指出，犬乳腺肿瘤良性比例占60%以上，而本次调查良性肿瘤仅占25.0%，恶性肿瘤发病高于良性肿瘤。出现这种情况的原因是统计样本较少，仅有40例，不足以准确显示犬乳腺肿瘤良性与恶性的比例。另外畜主对宠物犬乳腺肿物不了解，不重视，在不影响精神状态和正常饮食、生活的情况下往往不考虑送诊，这就导致从发病到送诊有较长的时间间隔，使肿瘤得以发展恶化。犬乳腺恶性肿瘤多为良性肿瘤发展而来，原发性恶性肿瘤非常少见，良性肿瘤不及时处理任其发展容易发生恶变，预后生存期较短。所以对于每位畜主发现宠物犬不明肿物，都应引起重视，及时送到医院诊治，是维系爱犬寿命的有效方法。4.2犬乳腺肿瘤临床诊断情况犬乳腺肿瘤是体表肿瘤，肉眼很容易发现，通过视诊、触诊、问诊、嗅诊可以犬乳腺肿瘤进行初步的判断，同乳腺炎、乳腺囊肿等良性疾病进行简单的鉴别。这种诊断方式在兽医临床上应用最为广泛，诊断的准确率与主治医师的临床经验密切相关。肿瘤的硬度、形态、游走性、破溃情况及对全身生理功能的影响是判断肿瘤性质及发展程度的重要依据，转移和扩散情况不易发现。超声断层扫描和X射线诊断可疑对肿瘤的位置、大小及性质进行更准确的判断，并可发现隐藏的转移病灶，对临床治疗及术后评估具有重要的指导意义。临床上因为经济或其他原因先进的检测和治疗手段不能广泛应用，乳腺肿瘤切除后续治疗和检查不能及时跟进，术后复发率和死亡率都很高。病理组学观察是乳腺肿瘤定性分析和详细分类的重要方法，诊断的准确率最高，操作比较繁琐，主要应用于其它诊断方法无法确诊的病例，也广泛用于科研和试验研究。4.3犬乳腺肿瘤治疗方法比较试验表明三种治疗方案有各自独特的优势，单纯是手术治疗简洁、快速，化学辅助治疗能有效延长生存期，中药辅助治疗能迅速提高免疫力、恢复体质，减少术后恢复期死亡率。早在上世纪六十年代，科学工作者已经认识到乳腺肿瘤是一种全身性系统性疾病而不仅仅是局部性病变，其治疗应从全身性治疗和局域性治疗两个方面入[76]手，且局部治疗的过分扩大并不能代替全身性治疗。手术切除是犬乳腺肿瘤最普遍的治疗方式，宠物疾病的治疗与人类差异很大，发病初期，对犬的精神状态和正常生活影响较小时，很少送到宠物医院就诊。所以送诊病例肿瘤一般较大，药物治疗一般很难取得明显效果，而且手术切除是最快速有效的方法。手术前对犬进行检查，免疫力低下或体质较弱的不宜立即进行手术，应做适宜的调理，待符合手术条件时在进行手术。早期良性肿瘤通过手术切除能取得比较满意的效果，手术切除前要明确肿瘤的大小、位置及与周围组织的情况。犬乳腺肿瘤病例一般为突出体表，形成明显的肿块，36 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究[77]肉眼很容易发现。但是对于肿瘤的转移、扩散情况，以及周围乳腺组织是否存在病变，一般检查很难发现，临床上畜主因为经济原因，不愿做全面检查，造成肿瘤切除后复发死亡概率很高。所以手术前对所有乳腺组织进行超声断层扫描或者X射线诊断，及时发现可疑病变并予以切除具有重要意义。本试验肿瘤病理为河北农大动物医院就诊的宠物犬，根据畜主的意愿和试验的需要进行检查和治疗，针对不同发病情况，采取不同的手术方式，对于已经扩散到周围乳腺组织的，要对周边可能侵染的乳腺组织一同切除，甚至全部乳腺组织，确保所有肿瘤病灶全部切除。淋巴转移及血液转移是肿瘤向远处扩散的主要途径，腋下及腹股沟淋巴结与犬乳腺组织相邻近、联系最为紧密，股沟淋巴结肿大的病犬，要将淋巴结及周围脂肪组织同时切除，腋下淋巴结临[78]近前肢运动神经，非必要是一般不予以切除，以免伤及运动系统。手术过程中要时刻观察病犬的心跳及呼吸状况并及时结扎血管，尤其是老年体衰或者小型病犬，严格控制出血量，避免不必要的死亡。术后及时消炎、补液，控制饮食，迅速愈合伤口恢复体质。单纯手术治疗在犬乳腺肿瘤的治疗上应用最为广泛，能够快速消除可见病变，取得了良好的效果。不足之处是单纯手术不能根除微小病灶，对转移、扩散情况任其发展并可能激发其快速生长，术后生存期普遍较短，复发及死亡率很高。化学治疗是临床上应用最广泛的肿瘤术后辅助治疗方法，通过系统性的全身性细胞毒性药物治疗，对转移、扩散的肿瘤细胞进行杀灭根除，以达到防止复发、延长寿[79]命甚至彻底治愈的的效果。有研究表明手术切除后会刺激远处微小病灶增殖并加速转移和扩散，所以手术后进行全身性辅助治疗来杀死未被检出的肿瘤细胞及微小病灶[80]具有重要意义。在各种肿瘤术后辅助治疗手段中化学药物治疗对仪器设备没有过高的要求，操作简便，价格相对便宜，在兽医临床能够得到接受和应用。临床上肿瘤化学治疗药物主要有三种类型：烷基化制剂（主要有环磷酰胺、顺铂为代表），主要影响DNA的合成；抗代谢药物（氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷）对抗DNA合成所需要的代谢物；天然产物（阿霉素、长春新碱、紫杉酚），来自植物和真菌的天然[81-83]产物，影响微管聚合、解聚及DNA、RNA的合成。临床治疗时化学肿瘤药物很[84]少单用，经常是组合用药。常见的用药方案TAC方案、CMF方案及AC方案。兽医临床上由于受到经济原因或治疗条件等众多因素的制约，化疗药物比较单一。试验中采用的化疗药物长春新碱是中药材长春花中提取的具有抗肿瘤功效的生物碱，是兽[85]医临床上应用最广泛的化学治疗药物。长春新碱抗肿瘤作用靶点是微管，主要通过[86,87]与微管蛋白结合从而破坏纺锤体微管的形成过程，使有丝分裂停止于中期，从而抑制肿瘤细胞的恶性增殖。长春新碱对所有处于增殖期的细胞具有细胞毒性，通过干扰蛋白质的合成过程、抑制RNA多聚酶的活力、阻断类脂质在细胞膜上的合成及氨[88]基酸转运等方式发挥抗肿瘤作用。在临床上广泛用于乳腺肿瘤、生殖细胞肿瘤及肺癌的治疗。化学治疗药物都具有细胞毒性，对恶性增殖细胞及正常分裂期细胞都具有破坏作用，副作用较大，治疗时要严格控制剂量尤其是体质较弱、免疫力低下的个体要及时监控身体状态，副作用反应强烈时应立刻终止化疗。乳腺肿瘤在中国古代就有了较为深刻的认识，在中医古典文献中被称为“乳岩”，也有的称之为“乳石痈”或“乳栗”，认为肿瘤的形成不只是由某一具体器官的功能37 全日制硕士专业学位（毕业）论文异常所引起，而是与正气衰弱、邪气强盛，入侵机体，导致脏腑失调、阴阳平衡紊乱[89]有关。“乳岩”患者一般可触及胸腺、胸锁乳突肌及相邻腋下有坚硬肿物，皮下多[90-92]发结节，甚至破溃腐烂，情绪暴躁易怒性，治疗应以扶正祛邪之法，解毒散结。目前发现的具有抗肿瘤功效的中药材有700多种，临床上广泛应用的有目前临床应用较多的中药有芙蓉叶、野艾、蒲公英、天葵子、瓜萎、天冬、龟板、斑蝥、薏苡仁、地鳖虫、皂角刺、山菜萸、留行子、八角莲、五倍子、漏芦、穿山甲、枇杷叶、山慈[93]菇、猫爪草、薜荔果、木通、蟾酥、夏枯草、蜂房。补药中的人参、党参、黄芪；泻下的大黄、火麻仁也都具有抗癌的功效。经典的乳腺肿瘤重要方剂主要有化岩汤（白术、茯苓、黄耆、忍冬藤、茜草根、当归、白芥子、人参）及乳安汤，具有补气健脾、[94]抗肿瘤的功效。本试验选用经典方剂化岩汤，并根据不同个体临床症状辩证施治，辅以山楂、乳香、女贞子、代赭石等对机体疼痛、呕吐及外周血象进行调节，以达到最佳治疗效果。方剂中白术、茯苓、党参、黄芪都有抗肿瘤作用，党参、黄芪可诱导[95]生成肿瘤坏死因子及白细胞介素生成并能提高干扰素水平，就有抗肿瘤的功效。黄芪还能促进提高机体细胞免疫能力，增强自然杀伤细胞的活性，发挥抑制肿瘤细胞增[96]殖和杀灭癌细胞的作用。当归是补血良药，通过补血提高机体免功能来间接抑制或[97,98]杀死肿瘤细胞，另外当归在体外可直接杀死肿瘤细胞。白术增强淋巴细胞免疫功能增强白细胞介素活性，抑制肿瘤细胞增殖扩散，降低病变组织的侵袭性，提高机体[99,100][101]对肿瘤抵抗力。张秀明总结茯苓不但能够安神养心、利水渗湿还具有抗肿的功效，广泛用于肝癌、乳腺癌及肺癌的治疗。中医治疗从扶正和驱邪两方面来进行，提高机体免疫力，防止复发转移的，且应用简便，副反应轻微，但是在根除病灶、杀灭癌细胞方面没有手术及放化疗显著。但是中医中药治法根据个体情况，辩证施治，具有很强的针对性，另外中药没有副作用，在祛邪抗癌的同时不伤机体。对于中晚期恶性肿瘤，老年或体质虚弱难以抵抗放化疗毒副作用的个体，应以增强体质、减少痛苦、提高生活质量为目的辅以中医药治疗，以达到提高机体免疫力，改善生存状态，提高患病动物生活质量并延长术后生存时间的目的。38 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究5结论5.1保定地区犬乳腺肿瘤临床病以恶性肿瘤为主，管状腺癌发病最高。5.27岁以上的老龄犬发病率较高，德国牧羊犬和北京犬为多发品种，乳腺良性疾病、子宫蓄脓、流产及假孕及肉类食谱是该病发生的危险因素。5.3犬乳腺肿瘤主要发生在尾侧腹对乳腺组织，左侧单乳区发病较高。5.4手术切除后化学辅助治疗能够有效高生存率，延长术后生存期。39 全日制硕士专业学位（毕业）论文参考文献[1]高金花,王琦,胡溢博,等.肿瘤转移的分子生物学机制[J].大连医科大学学报,2006,2(04):29-31.[2]韩焕兴,钱新宇.肿瘤发生学与肿瘤的临床防治[J].广东畜牧兽医科技,2006,7(1):14-16.[3]刘复生,刘彤华.肿瘤病理学[M].北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1997.[4]肖东.浅谈肿瘤与抑癌基因[J].福州师专学报,2000,4(03):13-15.[5]盂昭远.癌基因与抑癌基因究进展[J].口岸卫生控制,2003,8(2):41-43.[6]LeeCH,KweonOK.Mutationofp53tumorsuppressorgeneinspontaneouscaninemammarytumors[J].JVetSci,2002,2(3):321-325.[7]OchiaiK,MorimatsuM,TomizawaN,etal.CloningandsequencingfulllengthofcanineBrca2andRad51CDNA[J].JVetMedSci,2001,63(10):1103-1108.[8]鲁成武,阚德义,刘云.犬乳腺肿瘤的研究进展[J].畜牧兽医科技信息.2006,6(05):75-77.[9]朱江霞,张果,王益华,等.非甾体类抗炎药通过β-catenin/TCF4-survivin通路导结肠癌细胞凋亡[J].癌症,2004,23(7):737-741.[10]LucaVezzoni,GiorgioParmiani.Limitationsofthecancerstemcelltheory[J].Cytotechnology.2008,9(1):157-160.[11]ZhangT,OkevrelT,CooZQ,etal.EvidencethatAPCregulatessurvivingexpression:apossiblemechanismmechanismContributingtothesterncelloriginofcoloncancer[J].CancerRes.2001,61(24):8664-8667.[12]SusanA.Nowell,JiyoungAhn,JamesM.Rae,JoshuaO.Scheys,AndrewTrovato,CarolSweeney,StewartL.MacLeod,FredF.Kadlubar,ChristineB.Ambrosone.Associationofgeneticvariationintamoxifen-metabolizingenzymeswithoverallsurvivalandrecurrenceofdiseaseinbreastcancerpatients[J].BreastCancerResearchandTreatment.2005,11(3):97-101.[13]陈宇驰.肿瘤的主要致病因素[J].宠物医师,2011,7(2):20-42.[14]蒋红.饮食与肿瘤[J].实用医技杂志,2007,3(5):67-69.[15]于建玲.孕激素诱导的生长激素与犬的乳腺肿瘤[J].动物医学进展,2002,4(6):124-126.[16]単毅.乳腺癌的外科治疗[J].中国乡村医药,2003,5(2):26-28.[17]朱奎成,崔恒敏.猫乳腺肿瘤的外科治疗[J].上海畜牧兽医通讯.2004,6(04):18-20.[18]徐淮淮.核磁共振(NMR)与CT在价格、复杂性和功效方面的比较[J].国外医学(卫生经济分册),2003,3(3):205-206.[19]王悦.钼靶X线检查在乳腺癌诊断中的应用价值[J].中国实用医药,2015,7(03):189-191.[20]马捷,左敏,孙国平,等.乳腺癌钼靶Ｘ线表现的病理基础及孕激素受体的[J].实用放射学杂志,2006,22(11):1387-1390.[21]汤钊猷,现代肿瘤学第二版[M].上海:上海医科大学出版社,2000:830.[22]刘权,王玖华,沈镇宙.临床未触及肿块的乳腺钼靶片内簇状钙化临床意义的研究[J].肿瘤预防杂志,2000,8(6):25-26.40 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究[23]罗义,魏成刚,李阳敏.核磁共振、乳腺钼靶、彩超对早期乳癌影像诊断的对比表达分析[J].川北医学院学报,2014,5(01):113-115.[24]舒仪经,阚秀.我国细胞病理学的回顾与展望[J].中华病理学杂志,2005,34(10):625-627.[25]王长珍,徐晶.271例乳腺细针吸取细胞学诊断分析[J].邯郸医学高等专科学校学报,2003,11(06):487-492.[26]杨磊,游庆朋.乳癌148例术前术中病理诊断方法分析[J].中国误诊学杂志,2009,9(10):279-282.[27]佘锐萍.动物病理学[M].北京:中国农业出版社,2010:220.[28]朱振洪,金勇丰,张耀洲.肿瘤基因治疗的研究进展[J].生物学杂志,2001,24(03):365-371.[29]闫美凤,张永生p53与Gadd45a蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理学意义[J].医学研究生学报,2014,27(3):282-285.[30]OliveKP,TuvesonDA,RuheZC,YinB,WillisNA,BronsonRT,CrowleyD,JacksT.Mutantp53gainoffunctionintwomousemodelsofLi-Fraumenisyndrome.[J].Cell.2004,14(7):284-287.[31]LinderholmBK,LindahlT,HolmbergL,etal.Theexpressionofvascularendothelialgrowthfactorcorrelateswithmutantp53andpoorprognosisinhumanbreastcancer[J].CancerRes,2001,61(5):2256-2260.[32]PatilVW,TayadeMB,PingaleSA,etal.Thep53breastcancertissuebiomarkerinIndianwomen[J].BreastCancer(DoveMedPress),2011,3:71-78.[33]罗开,于泽平,王震龙,等.乳腺癌p53和c-erbB-2基因表达与腋淋巴结转移的相关性分析[J].医学研究生学报,2004,17(10):884-886.[34]Conzalez-SistalA,SanchezAB,DelRioMC,etal.AssociationbetweentumorsizeandimmunohistochemicalexpressionofKi-67,p53andBCL2inanode-negativebreastpopulationselectedfromabreastcancerscreeningprogram[J].AnticancerRes,2014,34(1):269-273.[35]EI-AHELALT,KHALIFAA,KAMELAS.Immunohistochemicalexpressionofp53andc-erbB-2proteininbreastcancerinEgypt[J].AnticancerRes,2000,20(3B):2145-2150.[36]WANGKun,ZHOUQing,ZHENGDengyun,etal.Thestudyofcorrelationbetweenp53,bcl-2,CD44v6expressionandmetastasisofbreastcancer[J].CancerResearchonPreventionandTreatment,2003,32(12):748-751.(inChinese)[37]LeeJO,YangH,GeorgescuMM,CristofanoA,MaehamaT,ShiY,DixonJE,PandolfiP,PavletichNP.CrystalstructureofthePTENtumorsuppressor:implicationsforitsphosphoinositidephosphataseactivityandmembraneassociation.[J].Cell.1999-10,99(3):323–34.[38]王知力,王文亮,郭双平,曾建新.PTEN蛋白在肝细胞肝癌中的表达及意义[J].第四军医大学学报,2001,21(20):532-536.[39]VarheseJS,ThompsoDJ,MichailidouK,etal.Mammoraphicbreastdensityandbreast[J].Oncoradiology,2013,2(8):154-155.[40]郭卫东,张惠洁,牛德森,等.β-catenin、LEF-1和PTEN在乳腺癌中的表达及意义[J].临床肿瘤学杂志,2013,12(24):279-280.41 全日制硕士专业学位（毕业）论文[41]邱昌伟,林德贵,陈双燕,等.PTEN、VEGF蛋白表达与犬乳腺肿瘤病理学特征的关系[N].中国农业大学学报,2007,4(02):243-246.[42]万文徽,李吉友.肿瘤标志的临床应用[J].中华医学检验杂志,1997,6(01):42-46.[43]詹镕洲.乳腺肿瘤C-erbB-2表达及预后意义的研究[J].诊断病理学杂志,2004,6(1):13-24.[44]李向东.C-erbB-2、ER和PR在乳腺癌中的表达与预后意义[J].现代肿瘤医学,2006,3:51-53.[45]TauchiK,HoriS,ItohH，etal.ImmunohistochemicalstudiesonOncogeneProducts(c-erbB-2,EGFR,c-mye)andestrogenreceptorinbenignandmalignantbreastlesions[J].VirchowsArchvAPhhol(Anat),1989,416:65[46]NationalInstitutesofHealthConsensusDevelopmentPanel.NationalInstitutesofHealthConsensusStatement:adjuvanttherapyforbreastcancer[J].JNatlCancerInstMonogr,2001,9(30):5-15.[47]WhelanTJ,JulianJ,WrightJ,etal.Doselocoregionalradiationtherapyimprovesurvivalinbreastcancer.Ameta-analysis[J].JClinOncol,2000,8(18):1220-1229.[48]许波.乳腺癌辅助内分泌治疗临床研究进展[D].蚌埠医学院,2012.[49]韩锐,孙燕.新世纪癌的化学预防与药物治疗[M].人民军医出版社,2005.[50]木拉提,克扎衣别克,哈木拉提·吾甫尔.抗肿瘤中药的分类及作用机理[J].新疆医科大学学报,2006,6(11):563-569.[51]KolfschotenGM,HulscherTM,DuyndamMC,etal.Variationinthekineticsofcaspase-3activation,Bcl-2phosphorylationandapoptoticmorphologyinunselectedhumanovariancancercelllinesasaresponsetodocetaxel[J].BiochemicalPharmacology.2002,4(11):876-889.[52]周玲,楼丽华.乳腺增生病相关因素的研究[J].吉林中医药,2007,7(6):62-64.[53]郑伯军,张飞云.210例乳腺癌患者的危险因素分析[J].中国现代普通外科进展,2013,3(6):31-33.[54]AndersonWF,ChuKC,ChangS,etal.Comparisonofage-specificincidenceratpatternsfordifferenthistopathologictypesofbreastcarcinoma[J].CancerEpidermiolBiomarkersPrer,2004,13(7):1128-1135.[55]史玉荣,马宁.乳腺癌家族史对乳腺癌临床特点及预后的影响[J].中华肿瘤防治杂志,2006,13(3):173-136.[56]姚华.犬肿物临床案例分析[J].中国兽医杂志,2006,8(7):50-51.[57]马薇.北京地区犬肿瘤发生率调查[J].中国兽医杂志,2013,4(01):75-79.[58]VettoJT,LuohSW,NaikA.Breastcancerinpremenopausalwomen[J].CurrProblSurg,2009,4(12):994-1004.[59]姚华,林德贵,田克恭,等.犬乳腺肿物临床病案分析[J].中国兽医杂志,2006,2(7):67-69.[60]卢国卫.浅谈犬乳腺肿瘤[J].中国科技信息,2010,2(5):21.[61]王彤光.60例犬乳腺肿瘤病理组织学、手术及预后的调查与研究[D].南京:南京农业大学,2012.[62]闫妮娜,冯士彬,杨雪艳.犬乳腺肿瘤的病理分析和标志物测定[J].畜牧与兽医,2013,3(10):82-85.42 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究[63]姚静,芮荣,侯加法.犬猫乳腺瘤的诊断与治疗[J].畜牧与兽医,2004,36(1):32-33.[64]张健,刘西亚,邓立新,等.几例犬肿瘤病病例的诊治与体会[C].中国畜牧兽医学会.全国兽医外科学第13次学术研讨会小动物医学第1次学术研讨会暨奶牛疾病第,次学术讨论会论文集.武汉.2006:631-632.[65]王洪斌.家畜外科学[M].北京:中国农业出版社,2005:5.[66]HartmannLC,SellersTA,FrostMH,etal.Benignbreastdiseaseandtheriskofbreastcancer[J].NEnglJMed,2005,353(3):229-237.[67]戴燕,陈昌松,田燕平,等.某部女性卵巢及乳腺肿瘤流行病学调查[J].军医进修学院学报,2002,2(4):42.[68]HermannsS,LinseisenJ,Chang-ClaudeJ.Nutritionandbreastcancerriskbyage50:ApopulationbasedcasecontrolstudyinGermany[J].NutritionandCancer,2002,2(3):124-131.[69]陈志,石慧娟,张婷.论乳腺癌发病的危险因素[J].中国医药指南,2012,2(29):79-81.[70]刘玉河.乳腺癌雌孕激素水平及其受体和c-erbB-2癌基因表达的临床意义[J].肿瘤预防杂志,2000,4(2):87-89.[71]MurffHJ,SpigelDR,SyngalS.DoesthispatienthaveafamilyhistoryofcancerAnevidencebasedanalysisoftheaccuracyoffamilycancerhistory[J].JAMA,2004,292(12):1480-1489.[72]徐玉琴.饮食与肿瘤[J].家庭中药,2005,11(7):42.[73]徐秀菊.浅谈肿瘤患者的饮食禁忌[J].实用中医药杂志,2004,2(05):34-37.[74]LaGuardiaM,GiammancoM.CanineBreastcancerandobesity[J].PanminervaMed,2001,43(2):123-133.[75]李花,崔洪平,袁冬.犬乳腺瘤的病例报告[J].中国畜牧兽医文摘,2012,28(6):154-155.[76]罗雪辉.乳腺肿瘤的临床超声诊断检查[J].中国中医药现代远程教育.2011,6(07):79-82.[77]杨帆,胡长敏,丁明星.7例犬乳腺肿瘤的病理组织学分析[J].畜牧与兽医,2012,5(S2):564-570.[78]刘云.犬乳腺肿瘤与手术[A].中国畜牧兽医学会小动物医学分会第四次学术研讨会、中国畜牧兽医学会兽医外科学分会第十六次学术研讨会论文集(2)[C].2009.[79]林奇,周士福.乳腺癌新辅助化疗研究进展[J].医学综述,2004,23(12):742-749.[80]刘复生.癌瘤转移规律的探讨[J].肿瘤防治杂志,2002,3(05):46-50.[81]付焱,顾吉顺,郭毅.紫杉烷类化合物研究进展[J].天然产物研究与开发,2004,2(03):24-27.[82]刘斌.紫杉醇新剂型-紫杉醇脂质体(力扑素)临床应用观察[J].中国医院用药评价与分析,2007,4(01):57-60.[83]陈强,张其忠,刘健,李丽庆,等.紫杉醇脂质体与传统紫杉醇治疗乳腺癌和非小细胞肺癌的随机对照研究[J].中华肿瘤杂志,2003,17(02):157-151.[84]RudolphM,Navari,MarieC,.Brenner,MeganN,Wilson.Treatmentofdepressivesymptomsinpatientswithearlystagebreastcancerundergoingadjuvanttherapy[J].BreastCancerResearchandTreatment,2008,2(1):184-189.[85]卢懿,侯世祥,陈彤长春花抗癌成分长春新碱研究的进展[J].中国中药杂志,2013,5(11):67-69.43 全日制硕士专业学位（毕业）论文[86]高正航,李卫东.长春花生物碱类药物研究概述[J].贵州农业科学,2005,7(06):83-87.[87]孙勇,周海英,张其.硫酸长春新碱控释膜药效学实验研究[J].中国药房,2000,14(02):367-372.[88]王瑾,王宫.长春碱类化合物的研究概况[J].福建中医学院学报,2005,6(S1):124-126.[89]张秀云,周凤琴.中药抗肿瘤研究进展[J].辽宁中医药大学学报,2012,2(11):27-29.[90]刘丽云.乳腺癌证治的中医文献研究[D].北京中医药大学,2008.[91]毕丽娟,司富春,王峰.古代治疗乳岩的方药分析[J].时珍国医国药,2006,23(04):657-663.[92]楼映,唐汉钧.唐汉钧治疗乳腺癌术后经验[J].辽宁中医杂志,2005,5(03):157-159.[93]张文雪,叶耀辉,黄慧莲,等.中医药治疗乳腺癌的研究进展[J].江中医药,2012,2(12):75-78.[94]汪明睿,孙晓龙.乳腺癌术后化疗配合应用乳安汤的临床研究[J].中国医药导报,2009,6(22):128-129.[95]孙燕.内科肿瘤学[M].北京:人民卫生出版社,2001:90.[96]黄天风.黄芪的抗肿瘤作用及其免疫机制的实验研究[J].中华临床医学研究杂志,2007,13(4):431-432.[97]GaoM,ZhangJH,ZhouFX,etal.AngelicasinensissuppresseshumanlungadenocarcinomaA549cellmetastasisbyregulatingMMPs/TIMPsandTGF-β1[J].OncologyReport,2011,7(2):585-593.[98]汪群红,项雪燕.当归补血汤抑瘤作用的实验研究[J].海峡药,2009,2(05):179-183.[99]吴国强,王晓宁,张会敏.中药对细胞凋亡的影响研究[J].河北中医,2004,26(11):879-880.[100]姚淑娟,刘伯阳.白术对化疗荷瘤小鼠减毒增效作用的研究[J].中国基层医药,2006,13(1):74-75.[101]张秀明.茯苓药理作用研究概况[J].中药材,2001,24(6):446-449.44 保定地区犬乳腺肿瘤流行病学调查及诊断治疗研究作者简历姓名：蔡小波性别：男出生日期：19880913籍贯：廊坊市大城县最后学历：兽医硕士毕业学校：河北农业大学求学经历：2009年9月—2013年6月就读于河北农业大学中兽医学院获农学学士学位2013年9月—2015年6月就读于河北农业大学兽医硕士专业获兽医硕士学位45 全日制硕士专业学位（毕业）论文致谢时光飞逝，岁月无痕，还没来得及细细品味研究生生涯就将结束了，我们即将离开校园踏入社会，在这迎接毕业的日子里，内心可谓是五味杂陈。回想研究生生活，导师的辛勤指导，同学朋友的热心帮助都历历在目，再此请各位老师、同学、师兄师姐们接受我诚挚的感谢。郑世学导师知识渊博、为人谦和、治学严谨，对工作和学生认真负责，并不断断创新、全身心的投入到教学研究中去，在工作和生活中都给我树立了好的榜样。自从入学以来，郑老师在各方面都给与了极大帮助和支持，关心我有没有生活上的困难，指导我工作的方向，询问我对未来工作的想法，并给以指点，使我迷茫的方向得以清晰明朗，明确了自己的努力方向。试验研究是在导师郑世学教授的指导和帮助下完成的，取得的每一分成果和进步都与郑老师的辛劳与智慧分不开。郑老师不辞辛劳，到处奔波，帮助我解决工作中遇到的问题，对我的倾心帮助和悉心指教使我印象深刻，受益终生，在此，郑重的向郑老师表示感谢，谢谢您!试验研究主要在河北农大宠物医院开展，马玉忠教授给予了莫大的支持和帮助，每一步工作的进行都与马老师的帮助分不开，工作中遇到问题时常请教马老师，马老师热心帮我协调宠物医院和畜主之间的事宜，为了我的工作费心费力，不胜感激。感谢河北农大宠物医院各位主治医师对我的大力支持和全力配合。感谢河北农大宠物医院各位护士及在此值班各位师弟、师妹在此期间对我的支持和帮助。感谢柴晓峰师兄、卫雪娇师姐、李三吓同学、孙利净同学、李鹏飞同学在试验工作中对我的帮助。感谢父母这么多年来对我的培养、关怀、支持和无私的付出，感谢父母对我学业的支持与鼓励，感谢父母为供我上学付出的辛劳和汗水，感谢父母对我一如既往的支持。谨此向所有关心我、支持我和帮助过我的老师们、同学们及亲戚朋友们致以最由衷的感谢，谢谢你们!蔡小波2015年5月46 ..河北农业大学研究生学院监制