侵染我国烟草的野生番茄花叶病毒分离株（wtmv-xc-1）的鉴定

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1、Universitycode：10223Classifiedcode：S432.1Graduatenumber：XS1211060Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationIdentificationofaWildtomatomosaicvirusisolate（WTMV-XC-1）infectingNicotianatabacuminChinaPostgraduate：SunHang-junSupervisor：ProfessorSunDong-mei

2、Major：PlantPathologyResearchdirection：PlantVirologyCollege：CollegeofAgronomyDaqingChina06,2015摘要野生番茄花叶病毒（Wildtomatomosaicvirus，WTMV）,是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的一个新成员，自2008年以来已经在越南的Laichau，泰国的Kanchanaburi，中国广东和海南报道了其存在。本实验从四川西昌烟草上分离到一个病毒分离株，经鉴定命名为WTMV-XC-1。利用显微观察法、接种侵染实验及生物信息学手段，对WTMV-XC-1进行了研究。电

3、子显微镜观察发现该分离株长740-760nm，直径约为13nm。XC-1侵染烟草5天后出现明脉，约8-14天出现花叶；侵染番茄10天后出现黄化，17天左右出现沿叶脉的坏死。XC-1的全基因组测序证实其包含9659个核苷酸（不包括3'多聚腺苷酸尾巴），具有典型的Potyvirus基因组特征。生物信息学分析发现：其基因组编码一个由3075个氨基酸组成的大的多聚蛋白；氨基酸序列比较显示XC-1的多聚蛋白剪切位点及保守基序在不同potyviruses间非常保守。将XC-1与其他potyviruses全基因组核酸进行多序列比对后，构建了Neighbor-joining系统发育树，发

4、现XC-1聚于ChiVMV组，并与WTMVLaichau分离株亲缘关系最近。相似性分析结果显示：XC-1与Laichau的全基因组核酸序列相似性最高，达到76.48%，与Guangdong分离株的CP基因核酸相似性最高，为94.34%。依据WTMVCP基因的保守序列设计了一对特异引物，并建立了快速检测WTMV的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测体系。研究结果显示该体系灵敏度高，特异性强，重复性好，可检测烟草和蚜虫体内的WTMV。本实验对WTMV-XC-1的全基因组进行了测序，该全基因组序列的获得对于人们了解WTMV的遗传信息及种群遗传分化具有重要的理论价值。建立的

5、SYBRGreenⅠrRT-PCR检测体系对研究WTMV的分布，流行与防控具有重要的实践指导意义。关键词：野生番茄花叶病毒，烟草，鉴定，基因组，荧光定量RT-PCRIAbstractWildtomatomosaicvirus(WTMV),amemberofthegenusPotyvirus,hasbeenreportedinLaichauofVietnam,KanchanaburiofThailand,HainanandGuangdongofChinasince2008.Avirusisolate,whichwasdetectedfromNicotianatabacums

6、howingseveremosaicsymptomsinXichangofSichuan,wasprovedtobeamemberofWTMVandwasnamedWTMV-XC-1inthisstudy.Microscopicobservation,inoculatingexperiment,andbioinformaticsmethodsweretakentostudyWTMV-XC-1.Ithadflexuousfilamentousparticlesabout740-760nminlengthand13nmindiameterbyelectronmicroscop

7、y.N.tabacumNC89inoculatedXC-1developedveinclearing5dayspostinoculation（dpi）andmosaicsymptoms8-14dpi,whileLycopersiconesculentuminoculatedXC-1developedyellowing10dpiandleafnecrosisalongvein17dpi.ThecompletegenomicsequenceofXC-1wasdeterminedtobe9659nucleotides,excludi