番茄双抗烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的基因工程研究

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1、ChineseAgriculturalScienceBulletinV01．21No．82005August·28·http：／／znth．chinajournal．net．ca番茄双抗烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的基因工程研究廖俊杰-，李进进，，许继勇：(-广东轻工职业技术学院食品与生物工程系，广东广州510300；2汕头市中蔬花卉有限公司，广东汕头515041)摘要：在烟草花叶病毒(TMV)外壳蛋白(CP)基因的5’和3’端分别合成寡聚核苷酸T5和T3，并分别引入ClaI和BamHI位点。采用PCR技术扩增得到TMVCP基因，用ClaI，BamHI消化后重组到pBluescriptKS

2、+中．并将该基因与黄瓜花叶病毒(CMV)CP基因重组在同一个表达栽体pKYLX7上获得双价CP基因表达栽体pKDTC，并转入根癌农杆茵LBA4404中，通过“叶盘法”转化番茄“丽春”、“京韩一号”，获得了番茄再生植株。通过点杂交、PCR检测和Southem杂交，证实“丽春”的L-2、L一5、“京韩一号”的JH一6号为转TMVCP和CMVCP基因的工程植株。工程植株在室温中表现正常，与对照植株相比，转基因植株表现明显的抗TMV、CMV性能。关键词：番茄；烟草花叶病毒：黄瓜花叶病毒；外壳蛋白基因；抗病毒基因工程StudiesonTmnsgenicTomatoPlantswithResista

3、ncetoTobaccoMosaicVirusandCucumberMosaicVirusLiaoJunjie1，LiJinjinl，XuJiyon92(1DepartmentofFoodandBio-technology,G珊mgdD，lgLightIndustryTechnologicCollege，Guangzhou510300；铆啪印z‘Zhon哥shuFlowerCo．，Ltd，ShantouGuangdong515041)Abstract：TheTMVCPgenewassynthesizedwithPolymeraseChainReaction(PCR)YusingthecD

4、NAofitsgenomicRNAasatemplate．AsyntheticC／aIsiteWasincludedinT5primerwhileaBamHIsiteinT3primer．thePCRproductwasdonedintotheClaI／BmHIsiteofpBluescriptKS+．Thenbivalentplantexpressionvector，pKDTC(TMV—CP+CMV-CP)，withdoubleresistancetoTMVandCMV，Wasconstructed，inwhicheachCPgeneWascontrolledbya35Spromoto

5、rofCaMV．TransgenictomatoplantswereregeneratedviaAgrobacteriumtransformationsystem，andanalyzedbydotblot，PCRandSouthernblot，theseresultsshowedthatbothgeneswereintegratedintothetransgenicplantlinesL-2，L-5ofLichunandJH一6ofJinghaIlNo1．Thetransgenicplantsgrewnormallyandobviouslyresistedtotheinfectionof

6、correspondingvirusesingreenhouse．Keywords：Tomato，Tobaccomosaicvirus，Cucumbermosaicvires，Coatproteingene，Virus—resistantgeneticengineering番茄是主要的蔬菜作物，在生产中，烟草花叶病毒难。植物抗病毒基因工程的发展，为培育抗性品种带(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)是危害番茄的主要病来了希望。自1986年Powell等翻将TMVCP基因在毒病害【l】，致使番茄严重减产，品质变劣。培育抗性品烟草中表达，获得了抗TMV的烟草工程植株以来，种是解决病毒危害的最有效

7、手段。然而，目前可利用又分别获得了抗TMV、CMV的烟草13]和辣椒M抗病的抗源材料还很少，因此给传统育种带来了很大困毒工程植株。徐香玲【6】采用发根农杆菌介导法将抗基金项目：汕头市科技攻关项目“番茄抗n吖和CMV的基因工程育种”(2002A108)。第一作者简介：廖俊杰，男，1965年出生，硕士学历，副研究员。研究方向：植物基因工程。E-mail：junjie33@gdqy．edu．矗．通信地址：510300广州市新港西路152号